Catalytic Activity of the α3β3γ Complex of F1-ATPase without Noncatalytic Nucleotide Binding Site*
Catalytic Activity of the α3β3γ Complex of F1-ATPase without Noncatalytic Nucleotide Binding Site*
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不含非催化核苷酸结合位点的 F1-ATP 酶 α3β3γ 复合物的催化活性*
DOI：
--
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发表时间：
1997
影响因子：
4.8
通讯作者：
Masasuke Yoshida
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
T. Matsui;E. Muneyuki;M. Honda;W. Allison;C. Dou;Masasuke Yoshida
嗜热芽孢杆菌 PS3 产生了 F1-ATP 酶突变体 α3β3γ 复合物，其中非催化核苷酸结合位点失去了结合核苷酸的能力。它以与野生型复合物相似的协同动力学（Km(1)，4 μM；Km(2)，135 μM）以初始速率水解 ATP。然而，初始速率迅速衰减至失活形式。由于失活的突变体复合物每摩尔复合物含有 1.5 mol ADP，因此这种失活似乎是由催化位点捕获抑制性 MgADP 引起的。事实上，用等摩尔 MgADP 提前孵育 10 分钟，突变体复合物几乎完全失活。对 ATP 水解开始后灭活进程作为 ATP 浓度函数的分析表明，在 Km(1) 范围内的 ATP 浓度下灭活效果最佳。在存在 ATP 的情况下，野生型复合物会解离预加载到催化位点上的抑制性 [3H]ADP，而突变型复合物则不会。月桂基二甲胺氧化物以 ATP 依赖性方式促进预载抑制性 [3H]ADP 的释放，并部分恢复失活突变体复合物的活性。添加 ATP 促进了预装在突变体复合物单个催化位点的 2',3'-O-(2,4,6-三硝基苯基)-ATP 的单位点水解。这些结果表明，完整的非催化位点对于 F1-ATPase 的连续催化周转至关重要，但对于在 ATP 浓度低于约 300 μM 时观察到的 F1-ATPase 的催化协同性而言并不是必需的。
A mutant α3β3γ complex of F1-ATPase from thermophilic Bacillus PS3 was generated in which noncatalytic nucleotide binding sites lost their ability to bind nucleotides. It hydrolyzed ATP at an initial rate with cooperative kinetics (Km(1), 4 μM; Km(2), 135 μM) similar to the wild-type complex. However, the initial rate decayed rapidly to an inactivated form. Since the inactivated mutant complex contained 1.5 mol of ADP/mol of complex, this inactivation seemed to be caused by entrapping inhibitory MgADP in a catalytic site. Indeed, the mutant complex was nearly completely inactivated by a 10 min prior incubation with equimolar MgADP. Analysis of the progress of inactivation after initiation of ATP hydrolysis as a function of ATP concentration indicated that the inactivation was optimal at ATP concentrations in the range of Km(1). In the presence of ATP, the wild-type complex dissociated the inhibitory [3H]ADP preloaded onto a catalytic site whereas the mutant complex did not. Lauryl dimethylamineoxide promoted release of preloaded inhibitory [3H]ADP in an ATP-dependent manner and partly restored the activity of the inactivated mutant complex. Addition of ATP promoted single-site hydrolysis of 2′,3′-O-(2,4,6-trinitrophenyl)-ATP preloaded at a single catalytic site of the mutant complex. These results indicate that intact noncatalytic sites are essential for continuous catalytic turnover of the F1-ATPase but are not essential for catalytic cooperativity of F1-ATPase observed at ATP concentrations below ~300 μM.
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DOI：
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发表时间：
1990-11
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Y. Milgrom;L. Ehler;P. Boyer
通讯作者：
Y. Milgrom;L. Ehler;P. Boyer
叶绿体F1-ATP酶非催化位点核苷酸结合的特性及其催化作用。
DOI：
--
发表时间：
1991
期刊：
The Journal of biological chemistry
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--
作者：
Milgrom,YM;Ehler,LL;Boyer,PD
通讯作者：
Boyer,PD
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DOI：
--
发表时间：
1993
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Milgrom,YM;Cross,RL
通讯作者：
Cross,RL
F1-ATPase 水解 ATP 的动力学以及阴离子激活、紧密结合的核苷酸去除以及共价修饰对 ATPase 的部分抑制的影响。
影响因子：
2.9
作者：
Wong,SY;Matsuno-Yagi,A;Hatefi,Y
通讯作者：
Hatefi,Y
DOI：
10.1016/s0021-9258(18)33672-x
发表时间：
1982-10
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
M. Gresser;J. A. Myers;P. Boyer
通讯作者：
M. Gresser;J. A. Myers;P. Boyer