近平滑假丝酵母ATCC 7330羰基还原酶CpCR的表达及酶学性质研究
近平滑假丝酵母ATCC 7330羰基还原酶CpCR的表达及酶学性质研究
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DOI：
10.13995/j.cnki.11-1802/ts.025002
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发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
龚大春
中科院分区：
文献类型：
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作者：
宋婷;王帅静;汪沉;吕育财;罗华军;郭金玲;龚大春
通过构建重组菌Escherichia coli BL21(DE3)/pACYC Duet-1-cpcr,表达带有His标签的近平滑假丝酵母Candida parapsilosis ATCC 7330羰基还原酶CpCR基因,并采用Ni-Agarose亲和层析对重组酶CpCR进行分离纯化和酶学性质研究。重组酶CpCR的基因序列全长1 107 bp,含有368个氨基酸,分子质量在41 kDa左右,比酶活力为20 U/mg;该酶在4 ~ 33 ℃的温度范围稳定性较好,相对酶活力在80%以上,T50值为37 ℃;该酶的pH适宜范围在6.2 ~ 7.5,在中性条件下稳定性最好; Cu~(2+)对该酶有强烈的抑制作用,在1 mmol/L条件下,相对酶活力下降30%,在5 mmol/L条件下,相对酶活下降50%;该酶对底物苯甲醛、正丁醛亲和能力强于4-氯-3-酮基-丁酸乙酯(4-chlor-3-keto-butyrate-ethyl ester,COBE),对苯甲醛或正丁醛的催化效率是对COBE的20倍左右;该酶是一种NADPH依赖型的羰基还原酶。本研究为羰基还原酶CpCR分子改造和催化应用提供了重要的基础数据。