Cloning and Expression of the Heterodimeric Deoxyguanosine Kinase/Deoxyadenosine Kinase of Lactobacillus acidophilus R-26 (*)
Cloning and Expression of the Heterodimeric Deoxyguanosine Kinase/Deoxyadenosine Kinase of Lactobacillus acidophilus R-26 (*)
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嗜酸乳杆菌 R-26 异二聚脱氧鸟苷激酶/脱氧腺苷激酶的克隆和表达 (*)
DOI：
--
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发表时间：
1995
影响因子：
4.8
通讯作者：
D. H. Ives
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
G. Ma;Young;D. H. Ives
在嗜酸乳杆菌R-26中，脱氧核苷酸合成需要两种独特配对的脱氧核苷激酶，脱氧胞苷激酶/脱氧腺苷激酶（dCK/dAK）和脱氧鸟苷激酶/脱氧腺苷激酶（dGK/dAK），以及胸苷激酶（TK）。使用聚合酶链反应生成的探针的N-末端氨基酸序列的基础上，我们已经克隆了串联基因的25-和26-kDa的多肽，其衍生的氨基酸序列和大小对应于野生型乳酸杆菌酶亚基。在大肠杆菌中的表达使用单个内源性启动子并产生活性dGK/dAK（提取蛋白的3%），其在特异性、动力学、异嗜性活化和终产物抑制方面与野生型dGK/dAK非常相似。克隆基因的比对揭示了它们的DNA序列中65%的同一性和衍生的氨基酸序列中61%的同一性。与疱疹病毒TK的比较揭示了三个保守区域：富含甘氨酸和甘氨酸的ATP结合基序和推定的TK脱氧核苷位点处的D/E-R-S/H基序。然而，在dGK与哺乳动物脱氧胞苷激酶的多重比对中发现更大的同源性，产生共有序列-D/E-R-S-I/V-Y-x-D-。dGK还具有p21水解GTP所需的序列（-Y-D-P-T-I/L-E-D-S/Y-Y-）。
Two uniquely paired deoxynucleoside kinases, deoxycytidine kinase/deoxyadenosine kinase (dCK/dAK) and deoxyguanosine kinase/deoxyadenosine kinase (dGK/dAK) are required, together with thymidine kinase (TK), for deoxynucleotide synthesis in Lactobacillus acidophilus R-26. Using polymerase chain reaction-generated probes based on N-terminal amino acid sequences, we have cloned tandem genes for 25- and 26-kDa polypeptides, whose derived amino acid sequences and size correspond to wild-type Lactobacillus enzyme subunits. Expression in Escherichia coli uses a single endogenous promoter and yields active dGK/dAK (3% of extracted protein) closely resembling wild-type dGK/dAK in specificity, kinetics, heterotropic activation, and end product inhibition. Alignment of cloned genes reveals 65% identity in their DNA sequences and 61% identity in derived amino acid sequences. Comparison with herpesviral TKs reveals three conserved regions: glycine- and arginine-rich ATP-binding motifs and a D/E-R-S/H motif at the putative TK deoxynucleoside site. Greater homology, however, is seen upon multiple alignment of dGK with mammalian deoxycytidine kinases, yielding the consensus sequence -D/E-R-S-I/V-Y-x-D-. dGK also shares a sequence (-Y-D-P-T-I/L-E-D-S/Y-Y-) required for GTP hydrolysis by p21.
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嗜酸乳杆菌 R-26 的异二聚脱氧鸟苷激酶/脱氧腺苷激酶：脱氧腺苷激酶亚基的异向激活涉及有限的蛋白水解和亲和标记。
影响因子：
2.9
作者：
Ikeda,S;Ives,DH
通讯作者：
Ives,DH
影响因子：
2.9
作者：
Yan,HG;Shi,ZT;Tsai,MD
通讯作者：
Tsai,MD
DOI：
10.1073/pnas.88.4.1531
发表时间：
1991-02-01
影响因子：
11.1
作者：
CHOTTINER, EG;SHEWACH, DS;MITCHELL, BS
通讯作者：
MITCHELL, BS
嗜酸乳杆菌 R-26 的异二聚脱氧核苷激酶：使用由终产物抑制剂控制的有限蛋白水解对亚基进行功能分配。
影响因子：
2.9
作者：
Ikeda,S;Ma,GT;Ives,DH
通讯作者：
Ives,DH
影响因子：
2.9
作者：
D. Dube;J. D. Parker;D. C. French;D. Cahill;S. Dube;M. Horwitz;K. Munir;L. Loeb
通讯作者：
D. Dube;J. D. Parker;D. C. French;D. Cahill;S. Dube;M. Horwitz;K. Munir;L. Loeb