Immunoaffinity Purification of HTC Rat Hepatoma Cell Plasminogen Activator-Inhibitor-1
Immunoaffinity Purification of HTC Rat Hepatoma Cell Plasminogen Activator-Inhibitor-1
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HTC 大鼠肝癌细胞纤溶酶原激活剂-抑制剂-1 的免疫亲和纯化
DOI：
10.1055/s-0038-1646047
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发表时间：
1987
影响因子：
6.7
通讯作者：
T. Gelehrter
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
R. Zeheb;U. Rafferty;M. Rodríguez;P. Andreasen;T. Gelehrter
摘要HTC大鼠肝癌细胞与合成的糖皮质激素地塞米松孵育后，通过诱导一种特定的纤溶酶原激活剂-抑制物(PAI-1)，迅速抑制组织型纤溶酶原激活剂的活性。利用制备的抗人纤维肉瘤细胞株HTC-1080 PAI-1的多克隆抗体，从地塞米松处理的HTC肝癌细胞的无血清培养上清液中纯化了HTC PAI-1，证明其与人PAI-1具有抗原性相关。纯化倍数大于100倍，收率大于75%。纯化的PAI-1在SDS-聚丙烯酰胺凝胶上以49 kDa的单一主带迁移，46 kDa的次带迁移。PAI-1被内切糖苷酶F消化会导致向迁移更快的物种转变，从而保持抑制活性。纯化后的PAI-1在pH 2.5条件下稳定，45°C处理15min后活性丧失50%，经十二烷基硫酸钠或盐酸胍处理后活性显著增强。纯化的PAI-1可迅速抑制组织型和尿激酶型纤溶酶原激活剂并与其形成复合体。制备了兔抗大鼠PAI-1多克隆抗体，可免疫沉淀游离PAI-1和复合PAI-1。
Summary Incubation of HTC rat hepatoma cells with the synthetic glucocorticoid dexamethasone rapidly inhibits tissue-type plasminogen activator activity by inducing a specific plasminogen activator-inhibitor (PAI-1). Using immobilized polyclonal antibodies raised against HT-1080 human fibrosarcoma PAI-1, we have purified HTC PAI-1 from serum-free medium conditioned by dexamethasone-treated HTC hepatoma cells and shown it to be antigenically related to human PAI-1. Greater than 100-fold purification with greater than 75% yield was achieved in a single step. The purified PAI-1 migrates on SDS-polyacrylamide gels as a single major band of 49 kDa with a minor band of 46 kDa. Digestion of PAI-1 with endoglycosidase F causes a shift toward faster migrating species which retain inhibitory activity. The purified PAI-1 was stable at pH 2.5, lost 50% of its activity after 15 min at 45° C, and showed marked activation after treatment with SDS or guanidine-HCl. Purified PAI-1 rapidly inhibited and formed complexes with both tissue-type and urokinase-type plasminogen activators. Polyclonal rabbit antirat PAI-1 antibodies were raised which immunoprecipitate both free and complexed PAI-1.
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DOI：
10.1016/s0021-9258(17)42691-3
发表时间：
1984-12
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
J. V. van Mourik;D. Lawrence;D. Loskutoff
通讯作者：
J. V. van Mourik;D. Lawrence;D. Loskutoff
反向纤维蛋白自显影：十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳后检测和部分表征蛋白酶抑制剂的方法。
影响因子：
2.9
作者：
Erickson,LA;Lawrence,DA;Loskutoff,DJ
通讯作者：
Loskutoff,DJ
地塞米松在 HTC 肝癌细胞中诱导纤溶酶原激活剂抑制剂。
DOI：
--
发表时间：
1984
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Cwikel,BJ;Barouski-Miller,PA;Coleman,PL;Gelehrter,TD
通讯作者：
Gelehrter,TD
内皮细胞产生纤溶酶原激活剂的潜在抑制剂，可以被变性剂激活。
DOI：
--
发表时间：
1985
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Hekman,CM;Loskutoff,DJ
通讯作者：
Loskutoff,DJ
HTC 肝癌细胞中地塞米松诱导的纤溶酶原激活剂抑制剂的表征。
DOI：
--
发表时间：
1986
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Coleman,PL;Patel,PD;Cwikel,BJ;Rafferty,UM;Sznycer-Laszuk,R;Gelehrter,TD
通讯作者：
Gelehrter,TD