Improving the stability and catalyst lifetime of the halogenase RebH by directed evolution.
Improving the stability and catalyst lifetime of the halogenase RebH by directed evolution.
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DOI：
10.1002/cbic.201300780
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发表时间：
2014-06-16
期刊：
影响因子：
3.2
通讯作者：
Lewis, Jared C.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Poor, Catherine B.;Andorfer, Mary C.;Lewis, Jared C.
我们以前报道过卤化酶RebH催化几种杂环和碳环的选择性卤化，但产物产率受到酶不稳定性的限制。在这里，我们使用定向进化来工程化RebH变体，3-LR，其Topt比野生型高5 °C以上，以及3-LSR，其Tm比野生型高18 °C。这些酶显着（高达4倍）提高了色氨酸和几种非天然底物的卤化转化率。RebH进化的初步证明不仅为直接合成应用提供了改进的酶，而且还为进一步的卤化酶进化建立了一个强大的方案。
We previously reported that the halogenase RebH catalyzes selective halogenation of several heterocycles and carbocycles, but product yields were limited by enzyme instability. Here, we use directed evolution to engineer a RebH variant, 3-LR, with a Topt over 5 °C higher than that of wild type, and 3-LSR, with a Tm 18 °C higher than that of wild type. These enzymes provided significantly (up to 4-fold) improved conversions for halogenation of tryptophan and several non-natural substrates. This initial demonstration of RebH evolution not only provides improved enzymes for immediate synthetic applications, but also establishes a robust protocol for further halogenase evolution.
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影响因子：
--
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LIAO, HH
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Arnold, Frances H.