CS-SELEX generates high-affinity ssDNA aptamers as molecular probes for hepatitis C virus envelope glycoprotein E2.
CS-SELEX generates high-affinity ssDNA aptamers as molecular probes for hepatitis C virus envelope glycoprotein E2.
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CS-SELEX产生高亲和力的ssDNA适体作为乙型肝炎病毒包膜糖蛋白E2的分子探针。
DOI：
10.1371/journal.pone.0008142
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发表时间：
2009-12-03
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Zhang XL
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chen F;Hu Y;Li D;Chen H;Zhang XL
目前，开发有效的诊断试剂以及针对丙型肝炎病毒（HCV）的治疗方法仍然是当务之急。在这项研究中，我们已经描述了一个活的细胞表面-系统进化配体指数富集（CS-SELEX）技术的发展和筛选功能的ssDNA适体，特异性结合HCV包膜表面糖蛋白E2。通过13轮筛选，CS-SELEX产生了高亲和力的ssDNA适体，并且所选择的ssDNA适体ZE 2表现出对E2阳性细胞的最高特异性和亲和力。HCV颗粒可以特异性捕获和诊断使用适配体ZE 2。在HCV患者中观察到HCV E2抗原-适体检测与HCV RNA定量或HCV抗体检测之间的良好相关性。此外，所选择的适体，特别是ZE 2，可以竞争性地抑制E2蛋白与CD 81（一种重要的HCV受体）的结合，并且在体外显著地阻断HCV细胞培养物（HCV-HCV）对人肝细胞（Huh 7.5.1）的感染。我们的数据表明，新选择的ssDNA适体，特别是适体ZE 2，为开发新的分子探针，作为HCV表面抗原的早期诊断试剂，或专门针对HCV的治疗药物，具有很大的希望。
Currently, the development of effective diagnostic reagents as well as treatments against Hepatitis C virus (HCV) remains a high priority. In this study, we have described the development of an alive cell surface -Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment (CS-SELEX) technique and screened the functional ssDNA aptamers that specifically bound to HCV envelope surface glycoprotein E2. Through 13 rounds of selection, the CS-SELEX generated high-affinity ssDNA aptamers, and the selected ssDNA aptamer ZE2 demonstrated the highest specificity and affinity to E2-positive cells. HCV particles could be specifically captured and diagnosed using the aptamer ZE2. A good correlation was observed in HCV patients between HCV E2 antigen-aptamer assay and assays for HCV RNA quantities or HCV antibody detection. Moreover, the selected aptamers, especially ZE2, could competitively inhibit E2 protein binding to CD81, an important HCV receptor, and significantly block HCV cell culture (HCVcc) infection of human hepatocytes (Huh7.5.1) in vitro. Our data demonstrate that the newly selected ssDNA aptamers, especially aptamer ZE2, hold great promise for developing new molecular probes, as an early diagnostic reagent for HCV surface antigen, or a therapeutic drug specifically for HCV.
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