M蛋白携带TC标签的重组新城疫病毒的构建及生物学特性鉴定
M蛋白携带TC标签的重组新城疫病毒的构建及生物学特性鉴定
复制标题
DOI：
10.3969/j.issn.1008-0589.201811054
复制
发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
刘胜旺
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
范振;孙军峰;赵冉;韩宗玺;刘胜旺
基质蛋白(M)是新城疫病毒(NDV)重要的结构蛋白。为监测NDV感染后M蛋白在细胞中的动态分布,本研究利用反向遗传操作技术,在NDV La Sota株全长cDNA中M基因编码区的C端插入由18个核苷酸编码的TC (Tetracysteine)标签,转染细胞经筛选获得携带TC标签的重组病毒La Sota-M-CTC。生长曲线测定结果显示,La Sota-M-CTC能够在鸡胚中有效复制,其生长曲线与亲本病毒La Sota相似。通过接种鸡胚测定鸡胚平均死亡时间检测La Sota-M-CTC的毒力。结果显示,La Sota-M-CTC的毒力与La Sota基本一致。此外,TC标签能够在重组病毒中稳定存在。将La Sota-M-CTC感染的细胞用双砷绿色染料FlAsH-EDT2染色后经激光共聚焦检测M蛋白在细胞中的分布。结果显示,在La Sota-M-CTC感染细胞后1 h~2 h时,M蛋白主要分布于细胞质中,而在病毒感染4 h后M蛋白进入细胞核中,并持续存在至病毒感染后的12 h。本研究为监测M蛋白在NDV感染过程中的动态分布以及阐明M蛋白在NDV感染中的作用机制提供了实验依据。