Epitope Mapping of Inhibitory Monoclonal Antibodies to Human von Willebrand Factor by Using Recombinant cDNA Libraries
Epitope Mapping of Inhibitory Monoclonal Antibodies to Human von Willebrand Factor by Using Recombinant cDNA Libraries
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利用重组 cDNA 文库对人血管性血友病因子抑制性单克隆抗体进行表位作图
作者：
G. Piétu;A. Ribba;G. Chérel;V. Siguret;B. Obert;C. Rouault;D. Ginsburg;D. Meyer
摘要 筛选了两个含有冯维勒布兰德因子 (vWF) 小片段（300-600 个碱基对）cDNA 片段的重组表达文库，以便将单克隆抗体 (MAb) 的表位定位到 vWF。在测试的 11 种单克隆抗体中，有 7 种被有效定位。 MAb 418 和 522 的表位抑制 vWF 与因子 VIII (FVIII) 的结合，分别位于 vWF 亚基的 Leu 2 和 Arg 53 之间以及 Glu 35 和 He 81 之间，位于称为 SpIII-T4 [氨基酸 (aa) 1-272] 的 N 端胰蛋白酶片段内，该片段包含 FVIII 的结合域。抑制 vWF 与糖蛋白 1b (GPIb) 结合的 MAb 710 的表位在胰蛋白酶 52/48 kDa 片段 (aa 449-728) 上的 Ser 593 和 Ser 678 之间被鉴定，该片段包含 GPIb、胶原、肝素、硫苷脂和内皮下细胞外基质的结合域。 MAb 723 的表位不会干扰 vWF 的任何已知功能，位于 Ser 523 和 Gly 588 之间。抑制 vWF 与胶原蛋白结合的 MAb 505 和 MAb 400 的表位在对应于 vWF 中心部分的 SPI 片段 (aa 911-1365) 内的 Leu 927 和 Arg 1114 之间被鉴定。亚基。 MAb 9 的表位可抑制 vWF 与 GPIIb/IIIa 的结合，在 Gin 1704 和 Asp 1746 之间的 vWF 亚基 C 端部分被鉴定，后者是粘附蛋白共有的 RGD 序列的第三个氨基酸，并作为整联蛋白受体的识别位点。
Summary Two recombinant expression libraries containing small (300-600 base pairs) cDNA fragments of von Willebrand Factor (vWF) were screened in order to map the epitope of monoclonal antibodies (MAbs) to vWF. Among eleven MAbs tested, seven were effectively mapped. The epitopes of MAbs 418 and 522, which inhibit the binding of vWF to Factor VIII (FVIII), were localized between Leu 2 and Arg 53 and between Glu 35 and He 81 of the vWF subunit respectively, within the N-terminal trypsin fragment called SpIII-T4 [amino acids (aa) 1-272] which contains a binding domain for FVIII. The epitope of MAb 710, which inhibits the binding of vWF to glycoprotein lb (GPIb), was identified between Ser 593 and Ser 678 on the tryptic 52/48 kDa fragment (aa 449-728) which contains binding domains for GPIb, collagen, heparin, sulfatides and subendothclium extracellular matrices. The epitope of MAb 723, which does not interfere with any known function of vWF, was localized between Ser 523 and Gly 588. The epitopes of MAb 505 and MAb 400, which inhibit the binding of v WF to collagen, were identified between Leu 927 and Arg 1114 within the SPI fragment (aa 911-1365) corresponding to the central part of the vWF subunit. The epitope of MAb 9, which inhibits the binding of vWF to GPIIb/IIIa, was identified in the C-terminal part of the vWF subunit between Gin 1704 and Asp 1746, the latter being the third aa of the RGD sequence common to adhesive proteins and serving as a recognition site for integrin receptors.
主要因子 VIII 结合域位于冯·维勒布兰德因子的氨基末端 272 个氨基酸残基内。
DOI：
--
发表时间：
1987
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Foster,PA;Fulcher,CA;Marti,T;Titani,K;Zimmerman,TS
通讯作者：
Zimmerman,TS
使用单克隆抗体绘制与血小板 GPIb 和 GPIIb/IIIa 以及胶原蛋白相互作用的不同冯维勒布兰德因子域。
影响因子：
20.3
作者：
Girma,JP;Kalafatis,M;Piétu,G;Lavergne,JM;Chopek,MW;Edgington,TS;Meyer,D
通讯作者：
Meyer,D