A fluorescent reporter of AMPK activity and cellular energy stress.
A fluorescent reporter of AMPK activity and cellular energy stress.
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DOI：
10.1016/j.cmet.2011.03.006
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发表时间：
2011-04-06
期刊：
影响因子：
29
通讯作者：
Cantley LC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Tsou P;Zheng B;Hsu CH;Sasaki AT;Cantley LC
当细胞中的 AMP/ATP 比率因能量应激而升高时，AMP 激活蛋白激酶 (AMPK) 就会被激活。在这里，我们描述了一种生物传感器 AMPKAR，它响应 AMPK 的磷酸化而表现出增强的荧光共振能量转移（FRET），从而可以对单细胞中的 AMPK 活性进行时空监测。我们表明，该报告基因对多种已知会引起能量应激的刺激做出反应，并且该反应依赖于 AMPK α1 和 α2 以及上游激酶 LKB1。有趣的是，我们发现 AMPK 的激活仅限于细胞质中对能量应激的反应，但在细胞质和细胞核中均可观察到对钙浓度升高的反应。最后，在微流体装置中使用该探针与 U2OS 细胞，我们观察到响应葡萄糖剥夺脉冲的 AMPK 激活和恢复的幅度和时间过程存在非常高的细胞间变异性。
AMP-activated protein kinase (AMPK) is activated when the AMP/ATP ratio in cells is elevated due to energy stress. Here we describe a biosensor, AMPKAR, which exhibits enhanced fluorescence resonance energy transfer (FRET) in response to phosphorylation by AMPK, allowing spatio-temporal monitoring of AMPK activity in single cells. We show that this reporter responds to a variety of stimuli that are known to induce energy stress and that the response is dependent on AMPK α1 & α2 and on the upstream kinase, LKB1. Interestingly we found that AMPK activation is confined to the cytosol in response to energy stress but can be observed in both the cytosol and nucleus in response to calcium elevation. Finally, using this probe with U2OS cells in a microfluidics device, we observed a very high cell-to-cell variability in the amplitude and time course of AMPK activation and recovery in response to pulses of glucose deprivation.
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影响因子：
--
作者：
Hawley SA;Boudeau J;Reid JL;Mustard KJ;Udd L;Mäkelä TP;Alessi DR;Hardie DG
通讯作者：
Hardie DG
影响因子：
4.1
作者：
Sanders, Matthew J.;Grondin, Pascal O.;Carling, David
通讯作者：
Carling, David
影响因子：
16
作者：
Cohen-Saidon, Cellina;Cohen, Ariel A.;Alon, Uri
通讯作者：
Alon, Uri
DOI：
10.1073/pnas.1009705107
发表时间：
2010-11-09
影响因子：
11.1
作者：
Oakhill, Jonathan S.;Chen, Zhi-Ping;Kemp, Bruce E.
通讯作者：
Kemp, Bruce E.
影响因子：
56.9
作者：
Shaw, RJ;Lamia, KA;Cantley, LC
通讯作者：
Cantley, LC