补肾中药对大剂量氢化可的松诱导的Y1细胞皮质酮合成的作用
补肾中药对大剂量氢化可的松诱导的Y1细胞皮质酮合成的作用
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DOI：
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发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
方肇勤
中科院分区：
文献类型：
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作者：
费敏红;潘志强;方肇勤
目的:探讨常用补肾中药对大剂量氢化可的松诱导的Y1 细胞皮质酮合成的作用。方法:采用水提醇沉法制备淫羊藿、仙茅、巴戟天、肉苁蓉、杜仲、菟丝子、补骨脂、知母、黄柏、生地黄、六味地黄丸和金匮肾气丸等常用补肾中药和复方的提取物。①分别以不同浓度( 0、2、4、8、16、31、63、125、250、500、1 000 μg /ml) 的补肾中药或复方干预细胞48 h，MTT 法检测Y1 细胞增殖的情况，筛选各单味中药和复方的适宜浓度。②将细胞分为对照组、模型组和中药( 复方) 组。除对照组外，其他各组Y1 细胞给予10 μmol /L 氢化可的松和5 μmol /L H89( 促肾上腺皮质激素信号阻断剂) 诱导模型; 造模同时，各中药( 复方) 组给予相应提取物。药物干预48 h 后，PCＲ 检测类固醇合成急性调节蛋白( Star) 、胆固醇侧链裂解酶( Cyp11a1) 、21α-羟化酶1 ( Cyp21a1) 、11β-羟化酶1( Cyp11b1) 、3β-羟基类固醇脱氢酶1( Hsd3b1) 、3β-羟基类固醇脱氢酶2( Hsd3b2) 等mＲNA 表达; Western blot 检测StAＲ、CYP11A1、CYP11B1、3β-HSD1、3β-HSD2 的蛋白表达; ELISA 检测细胞培养液皮质酮含量。结果:①MTT检测结果显示，黄柏对Y1 细胞增殖具有明显的抑制作用。筛选出的适宜药物浓度分别为黄柏10 μg /ml、知母100 μg /ml、其他中药( 复方) 200 μg /ml。②各单味中药和复方干预模型细胞48 h 后，PCＲ 检测结果显示，淫羊藿、仙茅、黄柏和生地黄对皮质酮合成的相关基因影响较显著。③与对照组相比，模型组Star、Cyp21a1 的mＲNA表达显著降低( P＜0．05，P＜0．01) ，Cyp11a1、Cyp11b1 和Hsd3b1 的mＲNA 表达显著升高( P＜0．05，P＜0．01) 。与模型组相比，生地黄组Cyp21a1 和Hsd3b1 的mＲNA 表达显著降低( P＜0．01) ; 仙茅组Cyp21a1、Cyp11a1 和Hsd3b1的mＲNA 表达显著降低( P＜0．01) ; 淫羊藿组Star 和Hsd3b1 的mＲNA 表达显著升高( P＜0．05，P＜0．01) ，Cyp21a1mＲNA 表达显著降低( P＜0．01) ; 黄柏组Cyp21a1、Cyp11a1、Cyp11b1 和Hsd3b1 的mＲNA 表达显著降低( P＜0．01) 。④与模型组相比，仙茅组3β-HSD2 蛋白表达显著降低( P＜0．01) ，黄柏组StAＲ、CYP11A1 和3β-HSD2 蛋白表达显著降低( P＜0．05，P＜0．01) ，3β-HSD1 蛋白表达显著升高( P＜0．01) 。⑤与模型组相比，仙茅、淫羊藿、黄柏作用后皮质酮含量显著降低( P＜0．01) 。结论:大剂量氢化可的松可诱导Y1 细胞培养液皮质酮含量显著升高。补肾中药淫羊藿对模型细胞的皮质酮合成具有促进作用，可上调Star 和Hsd3b1 基因表达; 而黄柏则具有抑制作用，可下调StAＲ、CYP11A1 和3β-HSD2 蛋白表达，降低皮质酮含量。