滇龙胆 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶 A 还原酶基因克隆、表达及分析
滇龙胆 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶 A 还原酶基因克隆、表达及分析
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DOI：
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发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
刘小莉
中科院分区：
文献类型：
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作者：
周伟;李媛;吴昕怡;刘小莉
目 的: 从药用植物滇龙胆中克隆得到 3-羟 基-3-甲基戊二酰辅酶 A 还 原 酶( 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA.reductase，HMGＲ) 基因的 cDNA 全长，构建原核表达载体使其在大肠埃希菌中表达，对其进行定量表达并进行生物信息学分.析。方法: 利用 PCＲ 扩增克隆得到滇龙胆 HMGＲ 基因 cDNA 全长。构建 pEASY-E1-HMGＲ 表达载体，IPTG 诱导表达。利用生.物信息学方法分析克隆到的 cDNA 序列并预测结构和功能。采用实时荧光定量聚合酶链式反应( Ｒeal-time PCＲ) 分析滇龙胆.根、茎、叶在 4 个不同发育时期的 HMGＲ 表达情况。结果: 克隆出两组 HMGＲ 基因，其中一组 HMGＲ cDNA 全长 1 747 bp，开放.阅读框长 1 697 bp，编码 565 个氨基酸，定名为 GＲHMGＲ-1; 另一组 HMGＲ cDNA 全长 1 731 bp，开放阅读框长 1 572 bp，编码.523 个氨基酸，定名为 GＲHMGＲ-2。SDS-PAGE 显示重组质粒成功表达目的蛋白。Blastp 发现，GＲHMGＲ-1，GＲHMGＲ-2 与同属.植物黄龙胆、秦艽的亲缘关系最为相近。结构分析显示都含有 2 个 HMG-CoA 结合位点，2 个 NADPH 结合位点，预测都定位于.内质网上。HMGＲ 在滇龙胆根、茎、叶这 4 个不同发育期均有表达，表达量最高的是叶。结论: 首次从滇龙胆中克隆到可能编.码 HMGＲ 酶的基因，可为深入探讨滇龙胆龙胆苦苷生物合成奠定基础。