人 D c R 3融合蛋白的表达 、纯化及多克隆抗体的制备
人 D c R 3融合蛋白的表达 、纯化及多克隆抗体的制备
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DOI：
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发表时间：
2007
期刊：
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通讯作者：
马忠森
中科院分区：
文献类型：
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作者：
马忠森
目的 :制备 D c R 3融合蛋白及其多克隆抗体 , 并鉴定其特异性 。 方法 :将亚克隆构建的 p E T 28a (+)/D c R 3重组表达质粒转化入大肠杆菌 ( E . c o l i ) B L 21菌株 , I P T G诱导表达 , 镍柱亲和层析法纯化目的蛋白 , S D S -P A G E及 We s t e r nb l o t 分析蛋白产物 , 将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体 , 并对其进行纯化及鉴定 。 结果 :p E T 28a (+) /D c R 3 重组表达质粒在 E . c o l i 中诱导表达相对分子质量 ( M r) 为 33 000的目的蛋白 , 表达量约占菌体蛋白总量的 38%, 纯化后的目的蛋白纯度达 98%。 We s t e r nb l o t 显示纯化蛋白与抗 D c R3单克隆抗体 ( m A b ) 具有良好的反应性 。 纯化后多克隆抗体效价达 1. 28 ×10-6 。 结论 :D c R3蛋白在 E . c o l i 中得到高效表达 , 成功制备高纯度 D c R3蛋白及高效价抗 D c R3 多克隆抗体 , 为研究 D c R 3在组织中的表达 、 分布 , 研制 E L I S A试剂盒.以检测恶性肿瘤及自身免疫性疾病等患者血清 D c R 3 表达水.平提供实验基础