DNA curtains to visualize chromatin interactions.
DNA curtains to visualize chromatin interactions.
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DNA 窗帘使染色质相互作用可视化。
DOI：
10.1016/j.ymeth.2023.07.001
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发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
BrooksCrickard,J
中科院分区：
文献类型：
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作者：
Woodhouse,Mitchell;BrooksCrickard,J
单分子成像的最新进展使得生化技术得以发展，可以直接实时可视化蛋白质-DNA 相互作用。这些技术依赖于衍射极限全内反射显微镜 (TIRFM)，并显着提高了我们对染色质背景下的 RNA 转录、DNA 复制、同源重组和一般 DNA 修复的理解。在这里，我们描述了一种称为 DNA 帘幕的通用单分子 TIRFM 技术，可直接可视化酶如何在染色质 DNA 上发挥作用。本手稿的目的是向读者介绍在长 DNA 片段上表达和重建核小体的方法，并使用带有 TIRFM 的 DNA 帘直接可视化该过程。
Recent advances in single molecule imaging have allowed the evolution of biochemical techniques that directly visualize protein-DNA interactions in real-time. These techniques rely on diffraction limited total internal reflection microscopy (TIRFM), and have significantly improved our understanding of RNA transcription, DNA replication, homologous recombination, and general DNA repair in the context of chromatin. Here we described a general single molecule TIRFM technique called DNA curtains to directly visualize how enzymes function on chromatinized DNA. The goal of this manuscript is to introduce the reader to methods to express and reconstitute nucleosomes on long stretches of DNA, and to directly visualize this process using DNA curtains with TIRFM.