A protocol for isolating and imaging large extracellular vesicles or midbody remnants from mammalian cell culture.
A protocol for isolating and imaging large extracellular vesicles or midbody remnants from mammalian cell culture.
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从哺乳动物细胞培养物中分离和成像大细胞外囊泡或中间体残留物的方案。
DOI：
10.1016/j.xpro.2023.102562
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发表时间：
2023-12-15
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Skop, Ahna R.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Park, Sungjin;Patel, Smit A.;Torr, Elizabeth E.;Dureke, Ashley-Grace N.;Mcintyre, Alina M.;Skop, Ahna R.
传统上，使用超离心从细胞培养基中分离中间体残余物（MBR），这是昂贵且耗时的。在这里，我们提出了一个协议，用于分离MBR或大的细胞外囊泡（EV）从哺乳动物细胞培养使用1.5%聚乙二醇6000（PEG 6000）或PEG 5000包被的金纳米粒子。我们描述了用于生长细胞、收集培养基以及从细胞培养基中沉淀MBR和EV的步骤。然后，我们通过免疫荧光抗体染色和免疫荧光成像详细表征的MBR。从细胞培养基中分离大型EV/MBR的两种廉价而简单的方案使用不同的显微镜技术制备用于表征的样品使用MKLP 1蛋白作为分离的大型EV或MBR的标记出版商注：进行任何实验方案都需要遵守当地机构的实验室安全和伦理指南。传统上，使用超离心从细胞培养基中分离中间体残余物（MBR），这是昂贵且耗时的。在这里，我们提出了一个协议，用于分离MBR或大的细胞外囊泡（EV）从哺乳动物细胞培养使用1.5%聚乙二醇6000（PEG 6000）或PEG 5000包被的金纳米粒子。我们描述了用于生长细胞、收集培养基以及从细胞培养基中沉淀MBR和EV的步骤。然后，我们通过免疫荧光抗体染色和免疫荧光成像详细表征的MBR。
Traditionally, midbody remnants (MBRs) are isolated from cell culture medium using ultracentrifugation, which is expensive and time consuming. Here, we present a protocol for isolating MBRs or large extracellular vesicles (EVs) from mammalian cell culture using either 1.5% polyethylene glycol 6000 (PEG6000) or PEG5000-coated gold nanoparticles. We describe steps for growing cells, collecting media, and precipitating MBRs and EVs from cell culture medium. We then detail characterization of MBRs through immunofluorescent antibody staining and immunofluorescent imaging. Two inexpensive and simple protocols for isolating large EVs/MBRs Isolate large EVs/MBRs from cell culture medium Prepare samples for characterization using different microscopy techniques Use of MKLP1 protein as a marker for isolated large EVs or MBRs Publisher’s note: Undertaking any experimental protocol requires adherence to local institutional guidelines for laboratory safety and ethics. Traditionally, midbody remnants (MBRs) are isolated from cell culture medium using ultracentrifugation, which is expensive and time consuming. Here, we present a protocol for isolating MBRs or large extracellular vesicles (EVs) from mammalian cell culture using either 1.5% polyethylene glycol 6000 (PEG6000) or PEG5000-coated gold nanoparticles. We describe steps for growing cells, collecting media, and precipitating MBRs and EVs from cell culture medium. We then detail characterization of MBRs through immunofluorescent antibody staining and immunofluorescent imaging.
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影响因子：
3.3
作者：
Matuliene, J;Kuriyama, R
通讯作者：
Kuriyama, R
影响因子：
4
作者：
Crowell, Elizabeth Faris;Gaffuri, Anne-Lise;Echard, Arnaud
通讯作者：
Echard, Arnaud
影响因子：
7.4
作者：
Garcia-Romero, N.;Madurga, R.;Ayuso-Sacido, A.
通讯作者：
Ayuso-Sacido, A.
DOI：
10.1007/s12154-009-0014-x
发表时间：
2009-03-01
期刊：
Journal of chemical biology
影响因子：
--
作者：
Dutheil, Delphine;Underhaug Gjerde, Anja;Holmsen, Holm
通讯作者：
Holmsen, Holm
影响因子：
3.4
作者：
Melikishvili, Sophie;Poturnayova, Alexandra;Hianik, Tibor
通讯作者：
Hianik, Tibor