Synergism in folding of a double mutant of the alpha subunit of tryptophan synthase.
Synergism in folding of a double mutant of the alpha subunit of tryptophan synthase.
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色氨酸合酶α亚基双突变体折叠中的协同作用。
DOI：
10.1021/bi00369a002
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发表时间：
1986
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Matthews,CR
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hurle,MR;Tweedy,NB;Matthews,CR
宾夕法尼亚州州立大学化学系，大学公园，宾夕法尼亚州16802，1986年8月1日接收; 1986年8月27日接收的修订版Mandarin pt摘要：对失活的单突变体Tyr-175-* Cys和Gly-211-* Glu和活性的双突变体Cys-175/Glu-211-* Glu进行了尿素诱导解折叠的研究。用紫外差光谱法对大肠杆菌色氨酸合成酶α亚基211的氨基酸序列进行了测定。使用平衡技术来确定突变蛋白质的展开的平衡自由能，以允许与野生型蛋白质进行比较。单突变体的稳定性变化总和不等于双突变体中观察到的变化。这种不平等是这两个残基之间的结构相互作用的证据。动力学研究表明，在pH7.8，25 ℃下，这种协同作用使天然形式不稳定1.5-2.0 kcal/mol，只发生在结构域缔合的最后限速步骤之后。特定氨基酸在蛋白质功能中所起的作用现在可以通过使用单个氨基酸替代来阐明（Craik等人，1985年）。诱变方法的逻辑延伸是确定蛋白质中两个氨基酸之间的功能和结构相互作用。
Department of Chemistry, The Pennsylvania State University, University Park, Pennsylvania 16802 Received August 1, 1986; Revised Manuscript Received August 27, 1986 abstract: The urea-induced unfolding of the inactive single mutants Tyr-175-* Cys and Gly-211-* Glu and the active double mutant Cys-175/Glu-211 of the a subunit of tryptophan synthase from Escherichia coli was examined by using ultraviolet difference spectroscopy. Equilibrium techniques were used to determine the equilibrium free energies of unfolding for the mutant proteins to permit comparison with the wild-type protein. The sum of the changes in stability for the single mutants is not equal to the change seen in the double mutant. This inequality is evidence for a structural interaction between these two residues. Kinetic studies show that thissynergism, which destabilizes the native form by 1.5-2.0 kcal/mol at pH 7.8, 25 C, occurs only after the finalrate-limiting step of domain association. e roles that particular amino acids play in the function of proteins can now be elucidated by using single amino acid replacements (Craik et al., 1985). A logical extension of the mutagenic approach is the determination of functional and structural interactions between two amino acids in a protein.
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