Analysis of the proteolysis of bioactive peptides using a peptidomics approach.
Analysis of the proteolysis of bioactive peptides using a peptidomics approach.
复制标题
使用肽学方法分析生物活性肽的蛋白水解。
DOI：
10.1038/nprot.2013.104
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发表时间：
2013-09
期刊：
影响因子：
14.8
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
鉴定使哺乳动物生物活性肽（例如肽激素和神经肽）失活的肽酶是一个尚未解决的重要挑战。该协议描述了一种最新的方法，结合液相色谱-质谱分析肽组学来识别生物活性肽的内源性裂解位点，随后基于这些裂解位点对候选肽酶进行生化纯化，并通过检查肽酶敲除小鼠来验证候选肽酶在生物活性肽的生理调节中的作用。我们重点介绍该方案的成功应用，发现胰岛素降解酶（IDE）调节生理降钙素基因相关肽（CGRP）水平，并详细介绍该方法的关键阶段和步骤。该协议需要7天的工作；然而，该协议的总时间变化很大，因为它依赖于生物试剂的可用性，即纯化的酶和基因敲除小鼠。该协议很有价值，因为它加快了哺乳动物肽酶（例如 IDE）的表征，在某些情况下可用于开发新的疗法。
Identifying the peptidases that inactivate bioactive peptides (e.g. peptide hormones and neuropeptides) in mammals is an important unmet challenge. This protocol describes a recent approach that combines liquid chromatography-mass spectrometry peptidomics to identify endogenous cleavage sites of a bioactive peptide, the subsequent biochemical purification of a candidate peptidase based on these cleavage sites, and validation of the candidate peptidase’s role in the physiological regulation of the bioactive peptide by examining a peptidase knockout mouse. We highlight successful application of this protocol to discover that insulin-degrading enzyme (IDE) regulates physiological calcitonin gene-related peptide (CGRP) levels and detail the key stages and steps in this approach. This protocol requires 7 days of work; however, the total time for this protocol is highly variable because of its dependence on the availability of biological reagents, namely purified enzymes and knockout mice. The protocol is valuable because it expedites the characterization of mammalian peptidases, such as IDE, which in certain instances can be used to develop novel therapeutics.
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DOI：
10.1073/pnas.69.12.3698
发表时间：
1972-01-01
影响因子：
11.1
作者：
DUCKWORT.WC;HEINEMAN.MA;KITABCHI, AE
通讯作者：
KITABCHI, AE
影响因子：
9.9
作者：
Ho, T. W.;Mannix, L. K.;Rapoport, A. M.
通讯作者：
Rapoport, A. M.
影响因子：
14.8
作者：
Coin, Irene;Beyermann, Michael;Bienert, Michael
通讯作者：
Bienert, Michael
DOI：
10.1073/pnas.0230450100
发表时间：
2003-04-01
影响因子：
11.1
作者：
Farris, W;Mansourian, S;Guénette, S
通讯作者：
Guénette, S
影响因子：
4.4
作者：
Alvarez-Manilla, G;Atwood, J;Pierce, M
通讯作者：
Pierce, M