河弧菌AL536_RS29525基因功能研究
河弧菌AL536_RS29525基因功能研究
复制标题
DOI：
--
复制
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
梁未丽
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
张安冉;刘笑舒;黄元铭;韩雨;刘平;李杰;梁未丽
目的 探讨河弧菌基因组中VflT6SS2核心基因簇上游paar基因簇中AL536_RS29525的序列特征、对VflT6SS2分泌功能和杀菌活性的影响以及可能的调控机制。方法 利用Muscle、GeneDoc软件进行AL536_RS29525基因编码产物的序列特征分析；同源重组技术构建AL536_RS29525的缺失株，PCR扩增AL536_RS29525编码序列克隆于pSRKTc获得回补质粒pSR-29525，继而导入∆AL536_RS29525得到回补株；Western Blot (WB)检测相应菌株中VflT6SS2 Hcp 效应子蛋白的表达和分泌，以大肠杆菌为prey的细菌竞争/杀菌实验检测VflT6SS2介导的菌株杀菌能力；基于Lux报告基因的启动子融合系统冷光检测确定AL536_RS29525缺失对VflT6SS2核心基因簇启动子和hcp启动子活性的影响；荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测hcp(tssD2)和vipA(tssB2) mRNA的相对表达水平。结果 AL536_RS29525同源基因编码蛋白的结构和功能较为保守；缺失AL536_RS29525负性影响VflT6SS2效应子Hcp的表达及分泌，降低VflT6SS2介导的菌株杀菌能力，回补AL536_RS29525可恢复缺失株Hcp的表达、分泌和杀菌能力；缺失株∆AL536_RS29525中hcp(tssD2)和vipA(tssB2)的mRNA表达量均低于野生株；而VflT6SS2的核心基因簇启动子和hcp启动子活性在∆AL536_RS29525缺失株和野生株之间无显著差异。结论 河弧菌AL536_RS29525基因较为保守，与霍乱弧菌以及弗尼斯弧菌的同源基因均具有较高的同源性。AL536_RS29525基因是河弧菌VflT6SS2的重要组成部分，为其Hcp效应子的正常表达、分泌功能以及VflT6SS2介导的杀菌活性所必需。AL536_RS29525可能转录后水平影响VflT6SS2的功能表达。