基于茎环引物探针法定量检测乙型肝炎病毒miR-3的方法学建立
基于茎环引物探针法定量检测乙型肝炎病毒miR-3的方法学建立
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DOI：
10.3969/j.issn.1000-4718.2020.09.027
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发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
王通
中科院分区：
文献类型：
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作者：
陈希;崔毅峙;王通
目的:本研究拟通过广泛筛选特异性引物探针组,建立一套乙型肝炎病毒(HBV)微小RNA-3(miR-3)的绝对定量PCR检测方法。方法:基于茎环引物RT-qPCR方法原理,设计茎环引物进行逆转录,结合SYBR Green法qPCR进行特异性初筛,选择特异性较佳的引物组,再结合TaqMan MBG探针,确定最佳的引物探针组,实现对HBV miR-3的定量检测。结果:共设计和测试了25套茎环引物组,利用基于SYBR Green的RT-qPCR方法,筛选出6套具有良好特异性的引物组,并进一步针对这些引物组设计和测试了相应的探针,获得了可精准定量HBV miR-3的引物探针组。测试结果表明,该引物探针组不但保证了高特异性,而且定量线性范围达到每个反应102~108拷贝,其扩增效率约为88%。结论:本研究确立了一套可用于绝对定量检测HBV miR-3的特异性引物探针组。