Measuring Membrane Protein Dimerization Equilibrium in Lipid Bilayers by Single-Molecule Fluorescence Microscopy.
Measuring Membrane Protein Dimerization Equilibrium in Lipid Bilayers by Single-Molecule Fluorescence Microscopy.
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通过单分子荧光显微镜测量脂质双层中的膜蛋白二聚化平衡。
DOI：
10.1016/bs.mie.2016.08.025
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发表时间：
2016
影响因子：
--
通讯作者：
Robertson JL
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chadda R;Robertson JL
膜中的二聚化反应是膜蛋白折叠、构象稳定性和细胞受体信号传导的基础。在这里，我们总结了一种方法，允许在脂质双层膜蛋白的平衡二聚反应的测量，使用亚基捕获到脂质体，然后通过单分子光漂白分析。这种策略是基于这样一个事实，即给定一个相当的标记效率，单体或二聚体形式的膜蛋白将引起明显不同的光漂白概率分布。这些方法已被用于测量Fluc F−离子通道的二聚体化学计量，以及脂双层中ClC-ec 1 Cl−/H+反向转运蛋白的二聚平衡常数。这种方法可以应用于任何膜蛋白系统，只要它可以被纯化，以定量方式荧光标记，并通过功能测定验证正确折叠，即使结构尚不清楚。
Dimerization reactions in membranes underlie membrane protein folding, conformational stability and cell receptor signaling. Here we summarize a method that allows for measurement of equilibrium dimerization reactions of membrane proteins in lipid bilayers, using subunit capture into liposomes followed by single-molecule photobleaching analysis. This strategy is grounded in the fact that given a comparable labeling efficiency, monomeric or dimeric forms of a membrane protein will give rise to distinctly different photobleaching probability distributions. These methods have been used to measure the dimer stoichiometry of the Fluc F− ion channel, and the dimerization equilibrium constant of the ClC-ec1 Cl−/H+ antiporter in lipid bilayers. This approach can be applied to any membrane protein system provided it can be purified, fluorescently labeled in a quantitative manner, and verified to be correctly folded by functional assays, even if the structure is not yet known.
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