虾青素对牛子宫内膜细胞炎症损伤的保护作用
虾青素对牛子宫内膜细胞炎症损伤的保护作用
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DOI：
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
万发春
中科院分区：
文献类型：
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作者：
张辰;谭秀文;魏晨;张相伦;靳青;刘桂芬;刘晓牧;万发春
【目的】利用虾青素较强的抗氧化特性，通过探讨黏膜屏障重塑对脂多糖（LPS）诱导的牛子宫内膜细.胞炎症的影响，为牛子宫内膜细胞炎的预防和治疗提供理论基础。【方法】培养液中添加1 μg·mL-1 LPS，培养子宫.内膜细胞6 h，检测培养液中炎症因子TNF-α 和IL-6 含量，建立细胞的体外炎症模型。在此基础上去掉培养液，.重新加入含1×10-6 mol·L-1 虾青素的新鲜培养液，继续培养细胞24 h。对照组为不添加LPS 或AST，LPS 组为仅.添加LPS，AST 组为添加LPS 和AST。采用ELISA 法检测培养液中TNF-α和IL-6 炎症因子分泌量以及细胞SOD 和.CAT 酶活性，利用流式细胞仪检测细胞内活性氧簇（ROS）水平，利用免疫荧光染色检测细胞紧密连接蛋白Claudin、.CDH1、TJP1 的分布情况，利用荧光定量RT-PCR 法和Western Blot 法分别检测Claudin、CDH1、TJP1 基因的mRNA.表达水平和蛋白表达水平。【结果】利用1 μg·mL-1 LPS 培养子宫内膜细胞6 h，检测发现培养液中炎症因子IL-6.和TNF-α 分泌水平显著高于对照组（P＜0.05），说明LPS 诱导子宫内膜细胞产生炎症反应。与对照组相比，细胞.内ROS 水平显著增加（P＜0.05），SOD 和CAT 酶活性都显著降低（P＜0.05），说明LPS 诱导的子宫内膜细胞炎症.造成了氧化损伤。加入1×10-6 mol·L-1 虾青素培养细胞24 h 后，发现培养液中IL-6 和TNF-α 因子的分泌水平显.著低于LPS 组（P＜0.05），同时ROS 阳性细胞比率显著下降（P＜0.05），SOD 和CAT 酶活性都显著升高（P＜0.05）。.LPS 组与对照组相比，细胞膜处Claudin、CDH1、TJP1 蛋白的荧光信号减弱，这3 种紧密连接蛋白的mRNA 和蛋白.表达水平也都显著降低（P＜0.05）。加入1×10-6 mol·L-1 虾青素培养24 h 后，与LPS 组相比，在细胞边缘.和细胞核内可以检测到荧光信号很强的Claudin、CDH1、TJP1 蛋白，而且这3 种紧密连接蛋白的mRNA 和蛋.白表达水平也都显著升高（P＜0.05）。【结论】虾青素通过降低子宫内膜细胞因炎症反应产生的氧化损伤，.减轻炎症导致的子宫内膜细胞紧密连接结构损伤，对子宫内膜的物理免疫屏障起保护作用，为牛子宫内膜.炎的预防和治疗提供理论借鉴意义。