A continuous coupled spectrophotometric assay for tyrosine aminotransferase activity with aromatic and other nonpolar amino acids.
A continuous coupled spectrophotometric assay for tyrosine aminotransferase activity with aromatic and other nonpolar amino acids.
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使用芳香族和其他非极性氨基酸连续耦合分光光度测定酪氨酸转氨酶活性。
DOI：
10.1006/abio.1997.2344
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发表时间：
1997
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Kirsch,JF
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Luong,TN;Kirsch,JF
本文报道了一种以保加利亚乳杆菌羟基异己酸脱氢酶(HO-HxoDH)为偶联酶的大肠杆菌嗜酸性转氨酶(TATase)的连续测定方法。α-酮酸，包括由TAT酶催化的L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-色氨酸、L-蛋氨酸和L-亮氨酸的转氨基形成的酸，在辅助酶的作用下转化为相应的α-羟基酸。该酶对NADH的伴随还原可伴随着340 nm处吸光度的降低。重要的是，HO-HxoDH催化的α-酮戊二酸还原(α-KG)是一种从吡哆胺-5‘-磷酸再生该酶的吡哆醛-5’-磷酸辅因子所需的TAT酶的共底物，是一个很差的底物，不会干扰测定。以HO-HxoDH为偶联酶的TATase(KCAT=180S−1，Km(L-Phe)=0.56 mM，Km(α-KG)=5 mM)催化苯丙氨酸转氨化反应的动力学参数与文献报道的结果基本一致。这种新的检测方法具有灵敏度高、底物特异性广等优点。
A continuous assay forEscherichia colityrosine aminotransferase (TATase) that employsLactobacillus delbrueckiissp.bulgaricushydroxyisocaproate dehydrogenase (HO-HxoDH) as a coupling enzyme is described. α-Keto acids, including those formed by TATase-catalyzed transamination ofl-phenylalanine,l-tyrosine,l-tryptophan,l-methionine, andl-leucine, are converted to the corresponding α-hydroxy acids by the auxiliary enzyme. The concomitant reduction of NADH by this enzyme can be followed as a decrease in absorbance at 340 nm. Importantly, HO-HxoDHcatalyzed reduction of α-ketoglutarate (α-KG), a cosubstrate of TATase required to regenerate the pyridoxal-5′-phosphate cofactor of this enzyme from pyridoxamine-5′-phosphate, is a poor substrate and does not interfere with the assay. The kinetic parameters determined for the transamination of phenylalanine by TATase (kcat= 180 s−1,KM (L-Phe)= 0.56 mm,KM (α-KG)= 5 mm) with HO-HxoDH as a coupling enzyme are comparable to those reported in the literature, which were determined by direct monitoring of the formation of phenylpyruvate at 280 nm. This new assay offers the advantages of increased sensitivity and broad substrate specificity.
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KIRSCHNER, K
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