A Microfluidic Mixer for Single-Molecule Kinetics Experiments
A Microfluidic Mixer for Single-Molecule Kinetics Experiments
复制标题
用于单分子动力学实验的微流体混合器
DOI：
10.3866/pku.whxb20110804
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发表时间：
2011
影响因子：
10.9
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
基于Navier-Stokes方程控制的流体动力学聚焦原理，设计并构建了用于单分子动力学实验的微流控混合器。该混合器由聚二甲基硅氧烷（PDMS）铸造而成，用透明熔融二氧化硅覆盖玻璃密封，具有低荧光背景和广泛的生物相容性，可在非平衡条件下进行单分子荧光检测。压力调节的样品输送系统便于装载样品，并允许精确和稳定的流速控制。将微流控混合器与单分子荧光共振能量转移（smFRET）相结合，可以测量蛋白质折叠中smFRET效率分布的时间过程。我们利用变性蛋白比混合过程快得多的事实来表征混合时间，使用供体和受体染料标记的葡萄球菌核酸酶（SNase）作为smFRET效率指标。通过监测混合过程中变性SNase的smFRET效率，我们确定在适合单分子检测的条件下，混合时间为150 ms。
We designed and built a microfluidic mixer based on the principle of hydrodynamic focusing governed by Navier-Stokes equation for single-molecule kinetics experiments. The mixer is a cast of poly(dimethylsiloxane) (PDMS) sealed with transparent fused-silica coverglass, which results in low fluorescence background and broad biological compatibility and this enables single-molecule fluorescence detection under nonequilibrium conditions. The pressure regulated sample delivery system is convenient for loading a sample and allows for precise and stable flow velocity control. The combination of microfluidic mixer and single-molecule fluorescence resonance energy transfer (smFRET) allows us to measure the time course of the distribution of the smFRET efficiency in protein folding. We used the fact that denatured protein collapses much faster than the mixing process to characterize the mixing time using donor and acceptor dyes labeled staphylococcal nuclease (SNase) as an smFRET efficiency indicator. By monitoring the smFRET efficiency of denatured SNase during the course of mixing, we determined that the mixing time was 150 ms under conditions suitable for single-molecule detection.
DOI：
10.1201/9781420050288
发表时间：
1999-11
期刊：
--
影响因子：
--
作者：
T. Papanastasiou;G. Georgiou;A. Alexandrou
通讯作者：
T. Papanastasiou;G. Georgiou;A. Alexandrou
DOI：
--
发表时间：
2006-09
期刊：
--
影响因子：
--
作者：
C. Gell;D. Brockwell;Alastair L. Smith
通讯作者：
C. Gell;D. Brockwell;Alastair L. Smith
粘性流体流动
DOI：
10.1016/b978-0-12-815489-2.00005-8
发表时间：
2019
期刊：
Free-Surface Flow
影响因子：
--
作者：
N. Katopodes
通讯作者：
N. Katopodes