TREM2基因过表达慢病毒载体的构建及其表达的研究
TREM2基因过表达慢病毒载体的构建及其表达的研究
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DOI：
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发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
王成志
中科院分区：
文献类型：
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作者：
冉江霞;石胜良;王成志
目的：构建小鼠编码２型髓样细胞触发受体（ＴＲＥＭ２）基因过表达慢病毒载体，并且对其体外表达目的基因的水平进行检测。方法：采用 ＰＣＲ扩增 ＴＲＥＭ２基因片段，将扩增产物连接至经 ＡｇｅＩ酶切后的线性化 ＧＶ３５８载体；经 ＰＣＲ 方 法 鉴 定 及ＤＮＡ 测序比对分析后，将其和包装质粒共转染至２９３Ｔ细胞并用药筛法行滴度测定。然后用重组慢病毒感染２９３Ｔ细胞，观察ＧＦＰ表达并用实时定量 ＰＣＲ检测 ＴＲＥＭ２的表达水平。结果：通过ＰＣＲ成功获得 ＴＲＥＭ２基因片段并连接到 ＧＶ３５８病毒载体 上，通过ＰＣＲ及 ＤＮＡ 测序鉴定均证实 ＴＲＥＭ２－ＧＶ３５８携带有正确的 ＴＲＥＭ２基因；在２９３Ｔ细胞中包装获得病毒并用药筛法测定病毒滴度为 ２．０×１０８ＴＵ／ｍＬ。感 染 ２９３Ｔ 细胞后可观察到大量明显的荧光细胞；实 时 定 量 ＰＣＲ 检 测 结 果 显 示，ＴＲＥＭ２过表达慢病毒感染２９３Ｔ细胞后 ＴＲＥＭ２的表达水平明显增加（Ｐ＜０．０５）。结论：成功构建 ＴＲＥＭ２－ＧＶ３５８慢病毒载体，为 ＴＲＥＭ２基因的后期研究提供了实验基础。