A-site mRNA cleavage is not required for tmRNA-mediated ssrA-peptide tagging.
A-site mRNA cleavage is not required for tmRNA-mediated ssrA-peptide tagging.
复制标题
DOI：
10.1371/journal.pone.0081319
复制
发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Hayes CS
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Janssen BD;Garza-Sánchez F;Hayes CS
在大肠杆菌中，长时间的翻译停滞允许mRNA降解到停滞的核糖体的A位。裂解A位密码子的酶尚不清楚，但其活性需要RNaseII来降解核糖体下游的mRNA。这种A-位点的mRNA切割过程被认为在翻译质量控制中起作用，因为停滞的核糖体通过tmRNA-SmpB“核糖体拯救”系统从A-位点截短的转录本中回收。在救援过程中，tmRNA编码的单链rA肽被添加到新生的链上，从而定位于从核糖体释放后降解的标记蛋白。在这里，我们研究了A位mRNA切割对tmRNA-SmpB活性的影响。使用一个在低效翻译终止时经历终止密码子切割的模型转录本，我们量化了含有(RnB+)或缺乏(ΔRnB)RNaseII的细胞中编码蛋白的SSrA-肽标记。在ΔRnB背景下，A-位基因的切割减少了大约三倍，但SSrA-标记的效率与RnB+细胞相同。此外，脉冲追逐分析表明，在rnb+和Δrnb细胞中，暂停的核糖体以相似的速度从测试转录本中回收。综上所述，这些结果表明A位截短的转录本不是tmRNA-SmpB介导的核糖体拯救所必需的，并提示A位mRNA的切割过程可能在其他循环途径中发挥作用。
In Escherichia coli, prolonged translational arrest allows mRNA degradation into the A site of stalled ribosomes. The enzyme that cleaves the A-site codon is not known, but its activity requires RNase II to degrade mRNA downstream of the ribosome. This A-site mRNA cleavage process is thought to function in translation quality control because stalled ribosomes are recycled from A-site truncated transcripts by the tmRNA-SmpB “ribosome rescue” system. During rescue, the tmRNA-encoded ssrA peptide is added to the nascent chain, thereby targeting the tagged protein for degradation after release from the ribosome. Here, we examine the influence of A-site mRNA cleavage upon tmRNA-SmpB activity. Using a model transcript that undergoes stop-codon cleavage in response to inefficient translation termination, we quantify ssrA-peptide tagging of the encoded protein in cells that contain (rnb+) or lack (Δrnb) RNase II. A-site mRNA cleavage is reduced approximately three-fold in Δrnb backgrounds, but the efficiency of ssrA-tagging is identical to that of rnb + cells. Additionally, pulse-chase analysis demonstrates that paused ribosomes recycle from the test transcripts at similar rates in rnb + and Δrnb cells. Together, these results indicate that A-site truncated transcripts are not required for tmRNA-SmpB-mediated ribosome rescue and suggest that A-site mRNA cleavage process may play a role in other recycling pathways.
登录
查看更多内容
影响因子：
10.5
作者：
Gottesman, S;Roche, E;Sauer, RT
通讯作者：
Sauer, RT
影响因子：
10.5
作者：
Herman, C;Thévenet, D;D'Ari, R
通讯作者：
D'Ari, R
影响因子：
64.8
作者：
Frazao, Carlos;McVey, Colin E.;Carrondo, Maria A.
通讯作者：
Carrondo, Maria A.
大肠杆菌K-12的构造框架，单基因敲除突变体：Keio Collection。
影响因子：
9.9
作者：
通讯作者：
--
DOI：
10.1073/pnas.120163297
发表时间：
2000-06-06
影响因子：
11.1
作者：
Datsenko, KA;Wanner, BL
通讯作者：
Wanner, BL