Role of the linker region connecting the reductase and heme domains in cytochrome P450BM-3.
Role of the linker region connecting the reductase and heme domains in cytochrome P450BM-3.
复制标题
连接细胞色素 P450BM-3 中还原酶和血红素结构域的接头区域的作用。
DOI：
10.1021/bi00035a031
复制
发表时间：
1995
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
T. Poulos
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
S. Govindaraj;T. Poulos
细胞色素P450BM-3是一种脂肪酸单加氧酶，含有催化P450血红素结构域，共价连接到二黄素P450还原酶结构域。通过删除部分连接子和改变连接子的序列，研究了连接血红素结构域c端和还原酶结构域n端的连接子区域的功能。删除3个或6个残基或改变连接体中间的Arg-Lys-Lys延伸到Ala-Ala-Ala不会改变任何一个结构域的功能特性。突变体保留完整的细胞色素c和铁氰还原酶活性，具有P450还原酶结构域的特征。突变体中的血红素结构域保留了与脂肪酸底物结合的能力，从而实现了从低到高的自旋位移，并表现出还原一氧化碳复合物的正常450 nm吸收带特征。然而，6个氨基酸缺失突变体表现出几乎无法检测到的脂肪酸羟化酶活性水平，3个氨基酸缺失突变体的活性约为10%，3个Ala取代突变体的活性约为50%。突变体还表现出较慢的还原酶到血红素的电子转移速率，这与脂肪酸羟化酶活性的丧失有关。这些结果表明，连接体的长度和序列对于还原酶和血红素结构域的正确定向是重要的，而还原酶和血红素结构域的正确定向显然是实现有效的还原酶到血红素的电子转移速率所必需的。
Cytochrome P450BM-3 is a fatty acid monooxygenase that contains the catalytic P450 heme domain covalently attached to a diflavin P450 reductase domain. The function of the linker region connecting the C-terminal end of the heme domain to the N-terminal end of the reductase domain has been studied by deleting parts of the linker and changing the sequence of the linker. Deleting three or six residues or changing an Arg-Lys-Lys stretch in the middle of the linker to Ala-Ala-Ala does not alter the functional properties of either domain. The mutants retain full cytochrome c and ferricyanide reductase activities characteristic of the P450 reductase domain. The heme domain in the mutants retains its ability to bind a fatty acid substrate giving the full low-to-high spin shift and exhibits the normal 450 nm absorption band characteristic of the reduced carbon monoxide complex. However, the six amino acid deletion mutant exhibit nearly undetectable levels of fatty acid hydroxylase activity, the three amino acid deletion mutant about 10% activity, and the three Ala substitution mutant about 50% activity. The mutants also exhibit slower rates of reductase-to-heme electron transfer rates that correlate with the loss in fatty acid hydroxylase activity. These results indicate that the length of the linker and, to a much less extent, the sequence are important for correctly orienting the reductase and heme domains, which apparently is necessary to achieve efficient reductase-to-heme electron transfer rates.
登录
查看更多内容
巴比妥诱导的巨大芽孢杆菌细胞色素 P450 102 (BM-3) 的亲和分离和表征。
影响因子：
3.9
作者：
Black,SD;Linger,MH;Freck,LC;Kazemi,S;Galbraith,JA
通讯作者：
Galbraith,JA
钙调蛋白通过双重机制控制神经元一氧化氮合酶。
DOI：
--
发表时间：
1994
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Abu-Soud,HM;Yoho,LL;Stuehr,DJ
通讯作者：
Stuehr,DJ
DOI：
10.1016/s0021-9258(18)60416-8
发表时间：
1989-07
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
R. T. Ruettinger;Long-Ping Wen;Armand J. FulcoP
通讯作者：
R. T. Ruettinger;Long-Ping Wen;Armand J. FulcoP
利用其单独的重组血蛋白和黄素蛋白结构域重建细胞色素 P-450BM-3 的脂肪酸羟基化功能。
DOI：
--
发表时间：
1992
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Boddupalli,SS;Oster,T;Estabrook,RW;Peterson,JA
通讯作者：
Peterson,JA
诱导型小鼠巨噬细胞一氧化氮合酶的纯化。
DOI：
--
发表时间：
1991
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Hevel,JM;White,KA;Marletta,MA
通讯作者：
Marletta,MA