稳定表达hACE2的293T细胞系的建立及功能分析
稳定表达hACE2的293T细胞系的建立及功能分析
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DOI：
10.11844/cjcb.2022.02.0010
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
刘春麟
中科院分区：
文献类型：
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作者：
黄楠;郎巧利;李莉萍;杨希;刘春麟
该研究旨在利用hACE2真核表达载体,通过电转法获得具有新型冠状病毒易感性的稳定表达hACE2的293T细胞株。将线性表达质粒pCMV-hACE2电转至293T细胞,经潮霉素B筛选后,利用间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、Western blot、流式分析法鉴定hACE2的表达, S-RBD蛋白和SARS-CoV-2假病毒分析细胞功能活性。利用250 μg/mL潮霉素B筛选获得了稳定高表达hACE2的细胞系293T-hACE2-D4。在该细胞中, RT-PCR检测到了大量hACE2基因的mRNA, Western blot、间接免疫荧光和流式分析法检测细胞表面hACE2蛋白表达情况(阳性细胞率为86.86%)。功能分析中, 293T-hACE2-27-D4细胞不仅能够与SARS-Cov-2 S-RBD蛋白相结合(结合率达84.26%),并且能够成功感染新型冠状病毒假病毒。该研究构建的稳定表达hACE2的293T细胞不仅能与S-RBD蛋白结合,还对新冠假病毒具有易感性,是探究病毒感染机制的有利工具。