Characterization of in vitro models of SLC30A10 deficiency.
Characterization of in vitro models of SLC30A10 deficiency.
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SLC30A10缺陷的体外模型的表征。
DOI：
10.1007/s10534-021-00296-y
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发表时间：
2021-06
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Bartnikas TB
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Prajapati M;Pettiglio MA;Conboy HL;Mercadante CJ;Hojyo S;Fukada T;Bartnikas TB
锰（Mn）是一种必需金属，在升高的水平下可能是有毒的。2012年，在具有SLC 30 A10（一种Mn外排转运蛋白）突变的患者中报告了Mn过量的第一个遗传原因。为了探索SLC 30 A10的体外功能，本研究使用CRISPR/Cas9基因编辑来开发稳定的SLC 30 A10突变体Hep 3B肝癌细胞系，并在活小鼠中进行胶原酶灌注以分离Slc 30 a10缺陷的原代肝细胞。我们还比较了原代细胞系与非原代细胞系的表型，以确定它们是否都作为SLC 30 A10已知生理作用的可靠体外模型。当暴露于过量Mn时，突变体SLC 30 A10 Hep 3B细胞具有增加的Mn水平和降低的活力。运输研究表明，减少54锰进口和出口的突变体细胞。虽然假设54 Mn输出受损，但考虑到SLC 30 A10在细胞Mn输出中的重要作用，54 Mn输入受损是出乎意料的。全基因组测序未鉴定出突变Hep 3B突变细胞系中已知Mn转运蛋白的任何额外突变。然后，我们评估了54锰运输原代肝细胞培养物中分离的遗传改变小鼠不同的肝脏锰水平。根据这些实验的结果，我们建议可以在体外研究SLC 30 A10缺乏对锰稳态的影响，但仅限于特定类型的细胞系。
Manganese (Mn), an essential metal, can be toxic at elevated levels. In 2012, the first inherited cause of Mn excess was reported in patients with mutations in SLC30A10, a Mn efflux transporter. To explore the function of SLC30A10 in vitro, the current study used CRISPR/Cas9 gene editing to develop a stable SLC30A10 mutant Hep3B hepatoma cell line and collagenase perfusion in live mice to isolate primary hepatocytes deficient in Slc30a10. We also compared phenotypes of primary vs. non-primary cell lines to determine if they both serve as reliable in vitro models for the known physiological roles of SLC30A10. Mutant SLC30A10 Hep3B cells had increased Mn levels and decreased viability when exposed to excess Mn. Transport studies indicated a reduction of 54Mn import and export in mutant cells. While impaired 54Mn export was hypothesized given the essential role for SLC30A10 in cellular Mn export, impaired 54Mn import was unexpected. Whole genome sequencing did not identify any additional mutations in known Mn transporters in the mutant Hep3B mutant cell line. We then evaluated 54Mn transport in primary hepatocytes cultures isolated from genetically altered mice with varying liver Mn levels. Based on results from these experiments, we suggest that the effects of SLC30A10 deficiency on Mn homeostasis can be interrogated in vitro but only in specific types of cell lines.
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DOI：
10.1074/mcp.m800258-mcp200
发表时间：
2009-03
期刊：
Molecular & cellular proteomics : MCP
影响因子：
--
作者：
Pan C;Kumar C;Bohl S;Klingmueller U;Mann M
通讯作者：
Mann M
DOI：
10.3791/56993
发表时间：
2018-02-12
期刊：
Journal of visualized experiments : JoVE
影响因子：
--
作者：
Cabral F;Miller CM;Kudrna KM;Hass BE;Daubendiek JG;Kellar BM;Harris EN
通讯作者：
Harris EN
DOI：
10.1007/978-1-59745-019-5_13
发表时间：
2010-01-01
期刊：
MOUSE CELL CULTURE: METHODS AND PROTOCOLS
影响因子：
--
作者：
Li, Wan-Chun;Ralphs, Kate L.;Tosh, David
通讯作者：
Tosh, David
影响因子：
9.8
作者：
Quadri, Marialuisa;Federico, Antonio;Bonifati, Vincenzo
通讯作者：
Bonifati, Vincenzo
影响因子：
9.8
作者：
Park, Julien H.;Hogrebe, Max;Marquardt, Thorsten
通讯作者：
Marquardt, Thorsten