A stabilized respiratory syncytial virus reverse genetics system amenable to recombination-mediated mutagenesis.
A stabilized respiratory syncytial virus reverse genetics system amenable to recombination-mediated mutagenesis.
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DOI：
10.1016/j.virol.2012.09.022
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发表时间：
2012-12-05
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Moore ML
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hotard AL;Shaikh FY;Lee S;Yan D;Teng MN;Plemper RK;Crowe JE Jr;Moore ML
我们描述了将细菌人工染色体（BAC）重组介导的诱变与负链RNA病毒的反向遗传学相结合的首个实例。建立了一个基于BAC的呼吸道合胞病毒（RSV）拯救系统。该系统的一个重要优势是RSV反基因组cDNA在BAC载体中得以稳定。所选用的RSV基因型是A2 - line19F，这是一种嵌合毒株，先前已表明其在小鼠中重现了RSV发病机制的关键特征。我们拯救出了两种RSV报告病毒，一种表达红色荧光蛋白单体Katushka 2（A2 - K - line19F），另一种表达海肾荧光素酶（A2 - RL - line19F）。作为原理验证，我们通过重组介导的BAC诱变高效地产生了一种RSV基因缺失突变体（A2 - line19FΔNS1/NS2）和一种点突变体（A2 - K - line19F - I557V）。结合序列优化的辅助表达质粒，BAC - RSV是一个稳定、通用且高效的反向遗传学平台，用于产生重组肺病毒。
We describe the first example of combining bacterial artificial chromosome (BAC) recombination-mediated mutagenesis with reverse genetics for a negative strand RNA virus. A BAC-based respiratory syncytial virus (RSV) rescue system was established. An important advantage of this system is that RSV antigenomic cDNA was stabilized in the BAC vector. The RSV genotype chosen was A2-line19F, a chimeric strain previously shown to recapitulate in mice key features of RSV pathogenesis. We recovered two RSV reporter viruses, one expressing the red fluorescent protein monomeric Katushka 2 (A2-K-line19F) and one expressing Renilla luciferase (A2-RL-line19F). As proof of principle, we efficiently generated a RSV gene deletion mutant (A2-line19FΔNS1/NS2) and a point mutant (A2-K-line19F-I557V) by recombination-mediated BAC mutagenesis. Together with sequence-optimized helper expression plasmids, BAC-RSV is a stable, versatile, and efficient reverse genetics platform for generation of a recombinant Pneumovirus.
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