Engineered CRISPR-Cas9 nuclease with expanded targeting space.
Engineered CRISPR-Cas9 nuclease with expanded targeting space.
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DOI：
10.1126/science.aas9129
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发表时间：
2018-09-21
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Nureki O
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Nishimasu H;Shi X;Ishiguro S;Gao L;Hirano S;Okazaki S;Noda T;Abudayyeh OO;Gootenberg JS;Mori H;Oura S;Holmes B;Tanaka M;Seki M;Hirano H;Aburatani H;Ishitani R;Ikawa M;Yachie N;Zhang F;Nureki O
RNA引导的内切酶Cas9切割其目标DNA，是一个强大的基因组编辑工具。然而，广泛使用的化脓性链球菌Cas9酶(SpCas9)需要NGG Protspacacer邻近基序(PAM)来进行靶向识别，从而限制了目标基因组座位。在这里，我们报告了一个经过合理设计的SpCas9变体(SpCas9-NG)，它可以识别松弛的NG PAM。晶体结构表明，与第三个碱基的碱基特异性相互作用的损失被新引入的非碱基特异性相互作用所补偿，从而使NG PAM能够识别。我们发现SpCas9-NG可在人细胞内源性靶点诱导携带NG PAM的INDELs。此外，我们还发现，SpCas9-NG与激活诱导的胞苷脱氨酶(AID)的融合在人细胞中介导了靶部位与NG PAM的C-T转换。
The RNA-guided endonuclease Cas9 cleaves its target DNA and is a powerful genome-editing tool. However, the widely used Streptococcus pyogenes Cas9 enzyme (SpCas9) requires an NGG protospacer adjacent motif (PAM) for target recognition, thereby restricting the targetable genomic loci. Here, we report a rationally engineered SpCas9 variant (SpCas9-NG) that can recognize relaxed NG PAMs. The crystal structure revealed that the loss of the base-specific interaction with the third nucleobase is compensated by newly introduced non–base-specific interactions, thereby enabling the NG PAM recognition. We showed that SpCas9-NG induces indels at endogenous target sites bearing NG PAMs in human cells. Furthermore, we found that the fusion of SpCas9-NG and the activation-induced cytidine deaminase (AID) mediates the C-to-T conversion at target sites with NG PAMs in human cells.
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影响因子：
64.8
作者：
Anders, Carolin;Niewoehner, Ole;Duerst, Alessia;Jinek, Martin
通讯作者：
Jinek, Martin
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46.9
作者：
Tsai, Shengdar Q.;Zheng, Zongli;Nguyen, Nhu T.;Liebers, Matthew;Topkar, Ved V.;Thapar, Vishal;Wyvekens, Nicolas;Khayter, Cyd;Iafrate, A. John;Le, Long P.;Aryee, Martin J.;Joung, J. Keith
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Joung, J. Keith
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作者：
Komor AC;Kim YB;Packer MS;Zuris JA;Liu DR
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Liu DR
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作者：
Zetsche B;Gootenberg JS;Abudayyeh OO;Slaymaker IM;Makarova KS;Essletzbichler P;Volz SE;Joung J;van der Oost J;Regev A;Koonin EV;Zhang F
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Zhang F
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作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
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Charpentier, Emmanuelle