LASS2诱导甲状腺未分化癌8505c细胞自噬、凋亡及相关机制的探讨
LASS2诱导甲状腺未分化癌8505c细胞自噬、凋亡及相关机制的探讨
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DOI：
10.3969/j.issn.1000-4718.2022.09.006
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
程晓明
中科院分区：
文献类型：
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作者：
赵青青;余云艳;王云;何维;杨艳;陈锐;杨小理;程晓明
目的:研究LAG1长寿保障同系物2(LASS2)对甲状腺未分化癌细胞株8505c凋亡及自噬的影响及可能的分子机制。方法:用Adv-GFP或Adv-LASS2-GFP重组腺病毒感染8505c细胞,细胞分为阴性对照(NC)组、空载体组(Adv-GFP组)和实验组(Adv-LASS2-GFP组)。感染48 h后提取各组细胞总RNA和蛋白,采用RT-qPCR和Western blot分别检测LASS2 mRNA和蛋白表达水平的变化;CCK-8和集落形成实验评价各组细胞增殖能力的差异;TUNEL染色评估各组细胞凋亡水平;透射电子显微镜观察细胞超微结构及自噬状态;Western blot检测各组细胞凋亡及自噬相关蛋白[细胞色素C(Cyto-C)、Bcl-2、Bax、p62、LC3-I、LC3-II和beclin-1]的表达水平;免疫共沉淀(Co-IP)联合液相色谱-质谱(LC-MS)鉴定与LASS2相互作用的蛋白,结合基因本体论(GO)数据库等分析并经Co-IP进一步验证互作关系。结果:与NC组和Adv-GFP组相比,Adv-LASS2-GFP组LASS2 mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P<0.01),且随时间延长Adv-LASS2-GFP组细胞增殖能力显著被抑制,集落形成能力降低,细胞凋亡增加(P< 0.01);透射电镜结果显示,与NC组和Adv-GFP组相比,Adv-LASS2-GFP组细胞可见双层膜结构的自噬小体及大量自噬溶酶体;Western blot结果显示,Adv-LASS2-GFP组Bcl-2和p62蛋白表达水平较NC组和Adv-GFP组均显著下调(P<0.01),Bax、Cyto-C和beclin-1表达及LC3-II/LC3-I比值均显著上调(P<0.01);Co-IP/LC-MS鉴定及GO等富集分析筛选出参与调控自噬信号通路且与LASS2相互作用的4个蛋白,分别为p62、HSC70、HSP90和CSNK2A1。Co-IP结果显示LASS2与p62不存在直接相互作用。结论:LASS2能促进8505c细胞凋亡并激活自噬,其作用机制可能是通过与p62/HSC70/HSP90/CSNK2A1相互作用而影响自噬和凋亡级联信号通路。