Cloning-free CRISPR/Cas system facilitates functional cassette knock-in in mice.
Cloning-free CRISPR/Cas system facilitates functional cassette knock-in in mice.
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DOI：
10.1186/s13059-015-0653-x
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发表时间：
2015-04-29
期刊：
影响因子：
12.3
通讯作者：
Tanaka K
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Aida T;Chiyo K;Usami T;Ishikubo H;Imahashi R;Wada Y;Tanaka KF;Sakuma T;Yamamoto T;Tanaka K
尽管CRISPR/Cas系统已经能够一步产生敲除小鼠，但盒敲入的低成功率限制了其应用范围。在这里，我们表明，无克隆，直接核递送具有化学合成的双RNA的Cas9蛋白复合物能够高效地消化靶标，从而产生携带功能盒的敲入小鼠，效率高达50%，而通常使用的方法仅为10%，由Cas9 mRNA和单向导RNA组成。我们的无克隆CRISPR/Cas系统有助于快速一步生成盒式基因敲入小鼠，通过提供各种体内遗传工具加速功能基因组研究。本文的在线版本（doi：10.1186/s13059-015-0653-x）包含补充材料，可供授权用户使用。
Although the CRISPR/Cas system has enabled one-step generation of knockout mice, low success rates of cassette knock-in limit its application range. Here we show that cloning-free, direct nuclear delivery of Cas9 protein complex with chemically synthesized dual RNAs enables highly efficient target digestion, leading to generation of knock-in mice carrying a functional cassette with up to 50% efficiency, compared with just 10% by a commonly used method consisting of Cas9 mRNA and single guide RNA. Our cloning-free CRISPR/Cas system facilitates rapid one-step generation of cassette knock-in mice, accelerating functional genomic research by providing various in vivo genetic tools. The online version of this article (doi:10.1186/s13059-015-0653-x) contains supplementary material, which is available to authorized users.
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影响因子：
64.8
作者：
Keskin H;Shen Y;Huang F;Patel M;Yang T;Ashley K;Mazin AV;Storici F
通讯作者：
Storici F
影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
影响因子：
64.5
作者：
Niu, Yuyu;Shen, Bin;Sha, Jiahao
通讯作者：
Sha, Jiahao
影响因子：
7
作者：
Ramakrishna S;Kwaku Dad AB;Beloor J;Gopalappa R;Lee SK;Kim H
通讯作者：
Kim H
通过反式编码的小 RNA 和宿主因子 RNase III 进行 CRISPR RNA 成熟。
影响因子：
64.8
作者：
Deltcheva, Elitza;Chylinski, Krzysztof;Sharma, Cynthia M.;Gonzales, Karine;Chao, Yanjie;Pirzada, Zaid A.;Eckert, Maria R.;Vogel, Joerg;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle