Reconstitution of Msp1 Extraction Activity with Fully Purified Components.
Reconstitution of Msp1 Extraction Activity with Fully Purified Components.
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用完全纯化的组分重建Msp 1提取活性。
DOI：
10.3791/62928
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发表时间：
2021-08-10
影响因子：
1.2
通讯作者：
Wohlever, Matthew L.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Fresenius, Heidi L.;Wohlever, Matthew L.
线粒体作为氧化磷酸化和细胞凋亡调节的中心，在人类健康中起着至关重要的作用。适当的线粒体功能取决于一个强大的质量控制系统，以维持蛋白质稳态。线粒体蛋白质稳态的下降与癌症、衰老、神经变性和许多其他疾病有关。Msp1是最近发现的AAA+ ATP酶，其通过从线粒体外膜去除尾部锚定的膜蛋白来维持线粒体蛋白质稳态。使用纯化的成分重组成蛋白脂质体，我们已经表明，Msp1是必要的，足以从脂质双分子层中提取模型尾锚定蛋白。我们简化的重组系统克服了阻碍膜蛋白提取详细研究的几个技术障碍。在这里，我们提供了详细的方法，脂质体的产生，膜蛋白重建，和Msp1提取测定。在确定的蛋白脂质体中用完全纯化的组分重建Msp 1提取活性的详细方案。
As the center for oxidative phosphorylation and apoptotic regulation, mitochondria play a vital role in human health. Proper mitochondrial function depends on a robust quality control system to maintain proteostasis. Declines in mitochondrial proteostasis have been linked to cancer, aging, neurodegeneration, and many other diseases. Msp1 is a recently discovered AAA+ ATPase that maintains mitochondrial proteostasis by removing tail-anchored membrane proteins from the outer mitochondrial membrane. Using purified components reconstituted into proteoliposomes, we have shown that Msp1 is necessary and sufficient to extract a model tail-anchored protein from a lipid bilayer. Our simplified reconstituted system overcomes several of the technical barriers that have hindered detailed study of membrane protein extraction. Here, we provide detailed methods for the generation of liposomes, membrane protein reconstitution, and the Msp1 extraction assay. Detailed protocol for reconstitution of Msp1 extraction activity with fully purified components in defined proteoliposomes.
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影响因子：
8.8
作者：
Anghel SA;McGilvray PT;Hegde RS;Keenan RJ
通讯作者：
Keenan RJ
DOI：
10.1038/nrm3226
发表时间：
2011-11-16
期刊：
Nature reviews. Molecular cell biology
影响因子：
--
作者：
通讯作者：
--
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DOI：
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