Mutation in murine coronavirus replication protein nsp4 alters assembly of double membrane vesicles.
Mutation in murine coronavirus replication protein nsp4 alters assembly of double membrane vesicles.
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鼠冠状病毒复制中的突变蛋白NSP4改变了双层膜囊泡的组装。
DOI：
10.1016/j.virol.2008.01.018
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发表时间：
2008-05-25
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Baker, Susan C.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Clementz, Mark A.;Kanjanahaluethai, Amornrat;O'Brien, Timothy E.;Baker, Susan C.
冠状病毒是正链RNA病毒，通过产生膜相关复制酶复合物在感染细胞的细胞质中复制。复制酶复合物在双膜囊泡（DMV）上组装。在这里，我们研究了假定的复制酶锚、非结构蛋白4（nsp 4）在鼠冠状病毒DMV组装中的作用。我们使用反向遗传学产生感染性克隆病毒（icv），其在nsp 4糖基化位点N176或N237处具有丙氨酸取代，或天冬酰胺至苏氨酸取代（nsp 4-N258 T），其被提出赋予温度敏感表型。我们发现nsp 4-N237 A是致死的，并且nsp 4-N258 T产生对病毒复制温度敏感的病毒（命名为Alb ts 6 icv）。对Alb ts 6 icv感染的细胞的分析显示，当细胞在非允许温度下孵育时，DMV显著减少，并且nsp 4和nsp 3都部分定位于线粒体。这些结果揭示了nsp 4在指导冠状病毒DMV组装中的关键作用。
Coronaviruses are positive-strand RNA viruses that replicate in the cytoplasm of infected cells by generating a membrane-associated replicase complex. The replicase complex assembles on double membrane vesicles (DMVs). Here, we studied the role of a putative replicase anchor, nonstructural protein 4 (nsp4), in the assembly of murine coronavirus DMVs. We used reverse genetics to generate infectious clone viruses (icv) with an alanine substitution at nsp4 glycosylation site N176 or N237, or an asparagine to threonine substitution (nsp4-N258T), which is proposed to confer a temperature sensitive phenotype. We found that nsp4-N237A is lethal and nsp4-N258T generated a virus (designated Alb ts6 icv) that is temperature sensitive for viral replication. Analysis of Alb ts6 icv-infected cells revealed that there was a dramatic reduction in DMVs and that both nsp4 and nsp3 partially localized to mitochondria when cells were incubated at the non-permissive temperature. These results reveal a critical role of nsp4 in directing coronavirus DMV assembly.
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影响因子：
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作者：
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