Chimeric RNA: DNA TracrRNA Improves Homology-Directed Repair In Vitro and In Vivo.
Chimeric RNA: DNA TracrRNA Improves Homology-Directed Repair In Vitro and In Vivo.
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DOI：
10.1089/crispr.2021.0087
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发表时间：
2022-03
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Ekker SC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Simone BW;Lee HB;Daby CL;Ata H;Restrepo-Castillo S;Martínez-Gálvez G;Kar B;Gendron WAC;Clark KJ;Ekker SC
近90%的人类致病突变是由小的遗传变异引起的，有效纠正这些错误的方法至关重要。产生小的DNA变化的一种方法是提供单链寡脱氧核苷酸（ssODN），其含有与基因组中靶基因座处的靶向双链断裂（DSB）偶联的改变。将ssODN供体与CRISPR-Cas9介导的DSB偶联是引入小变化的最简化的方法之一。然而，在许多系统中，这种方法是低效的，并且在遗传连接处引入不精确的修复。我们在此报道了一种使用ssODN与CRISPR-Cas9的时空定位来改善基因改变的技术。我们表明，通过将ssODN模板融合到反式激活RNA（tracrRNA），我们恢复了精确的遗传改变，在体外和体内具有增加的整合和精确度。最后，我们表明，这项技术可以用于增强基因转换与其他基因编辑工具，如转录激活因子样效应核酸酶。
Nearly 90% of human pathogenic mutations are caused by small genetic variations, and methods to correct these errors efficiently are critically important. One way to make small DNA changes is providing a single-stranded oligo deoxynucleotide (ssODN) containing an alteration coupled with a targeted double-strand break (DSB) at the target locus in the genome. Coupling an ssODN donor with a CRISPR-Cas9-mediated DSB is one of the most streamlined approaches to introduce small changes. However, in many systems, this approach is inefficient and introduces imprecise repair at the genetic junctions. We herein report a technology that uses spatiotemporal localization of an ssODN with CRISPR-Cas9 to improve gene alteration. We show that by fusing an ssODN template to the trans-activating RNA (tracrRNA), we recover precise genetic alterations, with increased integration and precision in vitro and in vivo. Finally, we show that this technology can be used to enhance gene conversion with other gene editing tools such as transcription activator like effector nucleases.
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影响因子：
4.2
作者：
Ma AC;McNulty MS;Poshusta TL;Campbell JM;Martínez-Gálvez G;Argue DP;Lee HB;Urban MD;Bullard CE;Blackburn PR;Man TK;Clark KJ;Ekker SC
通讯作者：
Ekker SC
DOI：
10.1038/mtna.2016.48
发表时间：
2016-07-12
期刊：
Molecular therapy. Nucleic acids
影响因子：
--
作者：
Glaser A;McColl B;Vadolas J
通讯作者：
Vadolas J
影响因子：
64.8
作者：
Komor AC;Kim YB;Packer MS;Zuris JA;Liu DR
通讯作者：
Liu DR
影响因子：
4.1
作者：
Liang, Xiquan;Potter, Jason;Chesnut, Jonathan D.
通讯作者：
Chesnut, Jonathan D.
影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle