Titratable Avidity Reduction Enhances Affinity Discrimination in Mammalian Cellular Selections of Yeast-Displayed Ligands.
Titratable Avidity Reduction Enhances Affinity Discrimination in Mammalian Cellular Selections of Yeast-Displayed Ligands.
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可滴定亲和力降低增强了酵母展示配体的哺乳动物细胞选择中的亲和力辨别力。
DOI：
10.1021/acscombsci.6b00191
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发表时间：
2017
影响因子：
--
通讯作者：
Hackel,BenjaminJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Stern,LawrenceA;Csizmar,CliffordM;Woldring,DanielR;Wagner,CarstonR;Hackel,BenjaminJ
针对哺乳动物细胞单层的酵母表面展示选择已被证明在分离具有新结合活性的蛋白质方面是有效的。这项技术的最新进展允许恢复具有甚至微摩尔结合亲和力的克隆。然而，在这种情况下，还没有显示出基于亲和力的选择的有效方法。这项研究证明了使用二硫苏糖醇降低可滴定亲和力的有效性，以实现这一目标。一系列具有一系列亲和力的表皮生长因子受体结合纤维连接蛋白结构域被用来定量鉴定每个酵母细胞产生强、中、弱亲和力之间的最强选择性的配体的数量。值得注意的是，将配体展示减少到2 NM结合剂的每个酵母细胞3,000-6,000个配体的选择性是17 NM结合剂的16倍。这些经验被应用于EPCAM结合的纤维连接蛋白种群的亲和力成熟，产生了一个富集池，其亲和力比通过标准细胞选择方法分选的类似池强得多。总之，这项研究为酵母展示的配体与全长细胞靶标的亲和力选择提供了一种简便的方法，并通过产生有望进一步应用的EpCAM结合配体证明了该方法的有效性。
Yeast surface display selections against mammalian cell monolayers have proven effective in isolating proteins with novel binding activity. Recent advances in this technique allow for the recovery of clones with even micromolar binding affinities. However, no efficient method has been shown for affinity-based selection in this context. This study demonstrates the effectiveness of titratable avidity reduction using dithiothreitol to achieve this goal. A series of epidermal growth factor receptor binding fibronectin domains with a range of affinities are used to quantitatively identify the number of ligands per yeast cell that yield the strongest selectivity between strong, moderate, and weak affinities. Notably, reduction of ligand display to 3,000–6,000 ligands per yeast cell of a 2 nM binder yields 16-fold better selectivity than that to a 17 nM binder. These lessons are applied to affinity maturation of an EpCAM-binding fibronectin population, yielding an enriched pool of ligands with significantly stronger affinity than that of an analogous pool sorted by standard cellular selection methods. Collectively, this study offers a facile approach for affinity selection of yeast-displayed ligands against full-length cellular targets and demonstrates the effectiveness of this method by generating EpCAM-binding ligands that are promising for further applications.
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影响因子：
5.6
作者：
Koide, Akiko;Wojcik, John;Gilbreth, Ryan N.;Hoey, Robert J.;Koide, Shohei
通讯作者：
Koide, Shohei
使用酵母展示和去污剂溶解的膜蛋白作为抗原源进行抗体亲和力成熟。
DOI：
10.1093/protein/gzs077
发表时间：
2013
期刊：
Protein engineering, design & selection : PEDS
影响因子：
--
作者：
Tillotson,BenjaminJ;deLarrinoa,IñigoF;Skinner,ColinA;Klavas,DerekM;Shusta,EricV
通讯作者：
Shusta,EricV
细胞和细胞裂解物：利用酵母表面展示工程化抗膜蛋白抗体的直接方法。
DOI：
10.1016/j.ymeth.2012.03.010
发表时间：
2013
期刊：
Methods (San Diego, Calif.)
影响因子：
--
作者：
Tillotson,BenjaminJ;Cho,YongKu;Shusta,EricV
通讯作者：
Shusta,EricV
影响因子：
11.2
作者：
Macarthur KM;Kao GD;Chandrasekaran S;Alonso-Basanta M;Chapman C;Lustig RA;Wileyto EP;Hahn SM;Dorsey JF
通讯作者：
Dorsey JF
影响因子：
56.9
作者：
BEAUDRY, AA;JOYCE, GF
通讯作者：
JOYCE, GF