SuperNova, a monomeric photosensitizing fluorescent protein for chromophore-assisted light inactivation.
SuperNova, a monomeric photosensitizing fluorescent protein for chromophore-assisted light inactivation.
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DOI：
10.1038/srep02629
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发表时间：
2013
影响因子：
4.6
通讯作者：
Nagai, Takeharu
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Takemoto, Kiwamu;Matsuda, Tomoki;Sakai, Naoki;Fu, Donald;Noda, Masanori;Uchiyama, Susumu;Kotera, Ippei;Arai, Yoshiyuki;Horiuchi, Masataka;Fukui, Kiichi;Ayabe, Tokiyoshi;Inagaki, Fuyuhiko;Suzuki, Hiroshi;Nagai, Takeharu
发色团辅助光失活（卡利）是一种强有力的技术，用于在具有活性氧（ROS）的活体样品中以时空限定的方式对生物分子进行急性扰动。然而，包括荧光素的化学光敏剂必须外源地添加到样本中，并且不能限于特定的细胞或亚细胞区室，遗传编码的光敏剂KillerRed可以通过组织特异性启动子或亚细胞定位标签来控制其表达。尽管有这种优势，KillerRed还没有成为一种通用的工具，因为它的二聚化倾向阻止了与感兴趣的蛋白质的融合。在这里，我们报告的发展单体变体的杀手红（超新星）的直接进化使用随机诱变。与KillerRed相反，与靶蛋白融合的SuperNova显示出正确的定位。此外，与KillerRed不同，SuperNova表达本身不会干扰有丝分裂细胞分裂。Supernova保留了产生ROS的能力，因此促进了基于CALI的靶蛋白功能分析，克服了KillerRed的主要缺点。
Chromophore-assisted light inactivation (CALI) is a powerful technique for acute perturbation of biomolecules in a spatio-temporally defined manner in living specimen with reactive oxygen species (ROS). Whereas a chemical photosensitizer including fluorescein must be added to specimens exogenously and cannot be restricted to particular cells or sub-cellular compartments, a genetically-encoded photosensitizer, KillerRed, can be controlled in its expression by tissue specific promoters or subcellular localization tags. Despite of this superiority, KillerRed hasn't yet become a versatile tool because its dimerization tendency prevents fusion with proteins of interest. Here, we report the development of monomeric variant of KillerRed (SuperNova) by direct evolution using random mutagenesis. In contrast to KillerRed, SuperNova in fusion with target proteins shows proper localization. Furthermore, unlike KillerRed, SuperNova expression alone doesn't perturb mitotic cell division. Supernova retains the ability to generate ROS, and hence promote CALI-based functional analysis of target proteins overcoming the major drawbacks of KillerRed.
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影响因子：
16.2
作者：
Suzuki, H;Kerr, R;Schafer, WR
通讯作者：
Schafer, WR
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3.4
作者：
Schuck, P
通讯作者：
Schuck, P
影响因子：
4.8
作者：
Pletnev, Sergei;Gurskaya, Nadya G.;Pletnev, Vladimir
通讯作者：
Pletnev, Vladimir
影响因子：
3.5
作者：
Carpentier, Philippe;Violot, Sebastien;Bourgeois, Dominique
通讯作者：
Bourgeois, Dominique
DOI：
10.1107/s0907444998003254
发表时间：
1998-09-01
期刊：
ACTA CRYSTALLOGRAPHICA SECTION D-BIOLOGICAL CRYSTALLOGRAPHY
影响因子：
--
作者：
Brunger, AT;Adams, PD;Warren, GL
通讯作者：
Warren, GL