亚硝酸盐胁迫下植物乳杆菌WU14 亚硝酸盐还原酶的食品级高效诱导表达及其酶学性质研究
亚硝酸盐胁迫下植物乳杆菌WU14 亚硝酸盐还原酶的食品级高效诱导表达及其酶学性质研究
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DOI：
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发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
徐波
中科院分区：
文献类型：
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作者：
应碧;昌晓宇;刘志文;周通;陈瑶;钟平安;徐波
【目的】研究亚硝酸盐胁迫下Lactobacillus plantarum WU14亚硝酸盐还原酶（Nitrite reductase, NirS）的作用机制。【方法】测定含0.02％～0.16％NaNO2的培养液中L. plantarum WU14的生长密度、pH及NaNO2降解量。通过PCR扩增和TA克隆得到NirS基因并克隆到乳酸乳球菌食品级细胞内高效诱导表达载体pRNA48中，获得重组菌L. lactis NZ9000/pRNA48-NirS。重组菌经30ng/ml nisin进行诱导后，经SDS-PAGE和盐酸萘乙二胺法分析目的蛋白的表达情况及NirS酶活。【结果】L. plantarum WU14能够在NaNO2浓度小于0.12％的MRS培养基中生长并降解一部分NaNO2，在0.10％NaNO2培养液中发酵24h后降解量达到最大，为56.34ug/mL，NirS酶活达2347.5U/mL。NirS可在L. lactis NZ9000中高效表达，该重组菌能够在NaNO2浓度低于0.10％的GM17培养基中生长并降解一部分NaNO2，在含0.04％NaNO2的培养液中亚硝酸盐降解量达到最大，为22.21mg/mL，NirS酶活为925.41U/mL。【结论】L. plantarum WU14的NirS能够降解高浓度的亚硝酸盐，并且经食品级异源表达的NirS具有较高的酶活力。本研究为探索研究亚硝酸盐降解的机理，建立发酵食品中亚硝酸盐降解的可控发酵体系奠定基础。