烟草花叶病毒辽宁分离物Northern杂交检测体系的建立
烟草花叶病毒辽宁分离物Northern杂交检测体系的建立
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DOI：
10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017.04.017
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发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
吴元华
中科院分区：
文献类型：
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作者：
李艳丽;安梦楠;王冠中;吴元华
为了建立烟草花叶病毒辽宁分离物（TMV-LN）的高特异性、高灵敏度的分子杂交检测体系，从粗提纯的 TMV-LN 粒子中提取 RNA，设计特异性引物通过 RT-PCR 扩增 TMV-LN 的 CP 和 3' 端非翻译区域，将片段连至 pUC119 载体获得重组质粒 pUCTMV-PP，体外转录获得地高辛（DIG）标记的 TMV-LN 正义链 RNA 杂交检测探针，同时构建 DNA 检测探针作为对照。采用 点印迹（Dot-blot）杂交和 Northern 杂交对比 RNA 探针和 DNA 探针对 TMV-LN 的检测特异性和灵敏性。检测结果表明，RNA 探针 和 DNA 探针在点印记杂交和 Northern 杂交中均表现出良好的检测特异性，RNA 探针在检测灵敏度方面要略好于 DNA 探针，且点 印迹杂交体系在病毒定性方面较为快捷，Northern 杂交体系在病毒基因组 RNA 的定量方面具有明显优势。