Engineering Dictyostelium discoideum myosin II for the introduction of site-specific fluorescence probes

Engineering Dictyostelium discoideum myosin II for the introduction of site-specific fluorescence probes
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工程盘基网柄菌肌球蛋白 II 用于引入位点特异性荧光探针

DOI:
10.1023/a:1024411208497
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发表时间:
2004
影响因子:
2.7
通讯作者:
A. Málnási
A. Málnási
中科院分区:
生物学3区
文献类型:
--
作者:
S. Wakelin;P. B. Conibear;R. Woolley;D. Floyd;Clive R. Bagshaw;M. Kovács;A. Málnási

文献摘要

参考文献

被引文献

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盘状网柄菌是分析肌球蛋白结构-功能关系的有效宿主。在这里,我们描述了在不同位置使用包含单个色氨酸残基的肌球蛋白II构建物,用于探测核苷酸结合部位、中继环和它们之间的通信路径上的事件。GFP融合也表达在肌球蛋白马达的N-和C-末端,以提供基于显微镜的动力学分析中肌动球蛋白解离反应的灵敏探针。我们报告了这些结构的荧光各向异性,在它们用作共振能量转移探针的背景下。
Dictyostelium discoideum is a useful host for the production of constructs for the analysis of structure–function relationships of myosin. Here we describe the use of myosin II constructs containing a single tryptophan residue, at different locations, for probing events at the nucleotide binding site, the relay loop and the communication path between them. GFP fusions have also been expressed at the N- and C-termini of the myosin motor to provide sensitive probes of the actomyosin dissociation reaction in microscope-based kinetic assays. We report on the fluorescence anisotropy of these constructs in the context of their use as resonance energy transfer probes.
DOI: --
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