Scintillation proximity assay of arginine methylation.
Scintillation proximity assay of arginine methylation.
复制标题
DOI：
10.1177/1087057111414903
复制
发表时间：
2012-02
影响因子：
--
通讯作者：
Zheng YG
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Wu J;Xie N;Feng Y;Zheng YG
蛋白质精氨酸甲基转移酶（PRMTs）催化的精氨酸甲基化是一种重要的蛋白质翻译后修饰，参与基因表达的表观遗传调控。一种快速有效的PRMT检测方法可以为深入研究PRMT的生物学功能以及筛选精氨酸甲基化的小分子抑制剂提供有价值的信息。目前，在用于PRMT活性测量的方法中，许多包含费力的分离程序，这限制了这些测定法在药物发现中用于高通量筛选（HTS）的应用。本文报道了一种基于闪烁邻近分析（SPA）原理的混合测量法测定PRMT活性。以3 H-Met为甲基供体，生物素修饰的组蛋白H4肽为甲基化底物。在PRMT催化的甲基化反应后，将链霉亲和素包被的SPA珠加入反应溶液中，并通过MicroBeta闪烁计数器检测SPA信号。不需要分离步骤，简化了测定过程，大大提高了测定速度。特别是，小型化和鲁棒性表明该方法适用于PRMT抑制剂的HTS。
Methylation of arginine residues, catalyzed by protein arginine methyltransferases (PRMTs), is one important protein post-translational modification involved in epigenetic regulation of gene expression. A fast and effective assay for PRMT can provide valuable information for dissecting the biological functions of PRMTs, as well as for screening small-molecule inhibitors of arginine methylation. Currently, among the methods used for PRMT activity measurement, many contain laborious separation procedures, which restrict the applications of these assays for high-throughput screening (HTS) in drug discovery. The authors report here a mix-and-measure method to measure PRMT activity based on the principle of scintillation proximity assay (SPA). In this assay, 3H-AdoMet was used as methyl donor, and biotin-modified histone H4 peptide served as a methylation substrate. Following the methylation reaction catalyzed by PRMTs, streptavidin-coated SPA beads were added to the reaction solution, and SPA signals were detected by a MicroBeta scintillation counter. No separation step is needed, which simplifies the assay procedure and greatly enhances the assay speed. Particularly, the miniaturization and robustness suggest that this method is suited for HTS of PRMT inhibitors.
登录
查看更多内容
DOI：
10.1016/j.bbrc.2005.03.170
发表时间：
2005-05-27
影响因子：
3.1
作者：
Wang, CH;Leffler, S;Hrycyna, CA
通讯作者：
Hrycyna, CA
影响因子：
4.8
作者：
Goulet, Isabelle;Gauvin, Gabrielle;Cote, Jocelyn
通讯作者：
Cote, Jocelyn
影响因子：
7.3
作者：
Feng, You;Li, Mingyong;Zheng, Yujun George
通讯作者：
Zheng, Yujun George
影响因子：
2.9
作者：
Collazo, E;Couture, JF;Trievel, RC
通讯作者：
Trievel, RC
影响因子：
2.9
作者：
Ibanez, Glorymar;McBean, Jamie L.;Luo, Minkui
通讯作者：
Luo, Minkui