Kinesin-1 activity recorded in living cells with a precipitating dye.
Kinesin-1 activity recorded in living cells with a precipitating dye.
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DOI：
10.1038/s41467-021-21626-1
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发表时间：
2021-03-05
影响因子：
16.6
通讯作者：
Winssinger N
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Angerani S;Lindberg E;Klena N;Bleck CKE;Aumeier C;Winssinger N
运动蛋白-1是一种进行性运动蛋白，它利用atp衍生的能量将各种细胞内货物运输到细胞周围。可视化和监测活细胞中运动蛋白运输的能力对于研究与货物运输相关的无数功能至关重要。在这里，我们报告了一种荧光小分子底物（QPD-OTf）的发现，该底物可以在微管（MTs）上沿其行走路径产生沉淀染料。QPD-OTf能够在不需要外部修饰的情况下监测细胞内的天然激酶1转运活性。体外实验表明，kinesin-1和MTs足以产生荧光晶体；在细胞中，来自高尔基体的运动蛋白-1特异性货物运输随着时间的推移显示为荧光痕迹。对接研究进一步支持了这些发现，表明基于活性的底物与激酶1的核苷酸结合位点结合。在活细胞中监测运动蛋白激酶-1的活性目前是困难的。在这里，作者报告了荧光小分子QPD-OTf，一种引起活性依赖性染料沉淀的激酶-1底物。
Kinesin-1 is a processive motor protein that uses ATP-derived energy to transport a variety of intracellular cargoes toward the cell periphery. The ability to visualize and monitor kinesin transport in live cells is critical to study the myriad of functions associated with cargo trafficking. Herein we report the discovery of a fluorogenic small molecule substrate (QPD-OTf) for kinesin-1 that yields a precipitating dye along its walking path on microtubules (MTs). QPD-OTf enables to monitor native kinesin-1 transport activity in cellulo without external modifications. In vitro assays show that kinesin-1 and MTs are sufficient to yield fluorescent crystals; in cells, kinesin-1 specific transport of cargo from the Golgi appears as trails of fluorescence over time. These findings are further supported by docking studies, which suggest the binding of the activity-based substrate in the nucleotide binding site of kinesin-1. Monitoring the activity of the processive motor protein kinesin-1 in live cells is currently difficult. Here the authors report the fluorogenic small molecule QPD-OTf, a kinesin-1 substrate that causes activity-dependent dye precipitation.
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DOI：
10.1083/jcb.140.6.1395
发表时间：
1998-03-23
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Hancock WO;Howard J
通讯作者：
Howard J
横纹肌肉中能量网络的亚细胞连接分析。
影响因子：
16.6
作者：
Bleck CKE;Kim Y;Willingham TB;Glancy B
通讯作者：
Glancy B
DOI：
10.1083/jcb.128.3.293
发表时间：
1995-02
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Lippincott-Schwartz J;Cole NB;Marotta A;Conrad PA;Bloom GS
通讯作者：
Bloom GS
DOI：
10.1016/j.str.2018.07.011
发表时间：
2018-11-06
期刊：
Structure (London, England : 1993)
影响因子：
--
作者：
Cockburn JJB;Hesketh SJ;Mulhair P;Thomsen M;O'Connell MJ;Way M
通讯作者：
Way M
影响因子：
4
作者：
Chyan W;Raines RT
通讯作者：
Raines RT