小鼠髓样细胞触发受体-2基因小发卡状RNA慢病毒载体构建
小鼠髓样细胞触发受体-2基因小发卡状RNA慢病毒载体构建
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DOI：
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发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
王成志
中科院分区：
文献类型：
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作者：
冉江霞;石胜良;王成志
目的 构建小鼠髓样细胞触发受体-2( TREM2) 基因小发卡状 RNA( shRNA) 慢病毒表达载体，并检测其功能。方法 针对小鼠 TREM2 基因设计合成 3 对 shRNA 序列，将其分别与线性化 GV248 载体连接，转化至感受态大肠埃希菌 DH5α，构建 TREM2 基因 shRNA 重组慢病毒载体( TREM2-shRNA-1、TREM2-shRNA-2、TREM2-shRNA-3) 。用重组载体转染 293T 细胞，荧光显微镜下观察绿色荧光( GFP) 后，进行滴度测定。取对数生长期 BV2 小胶质细胞，分为 TREM2-shRNA-1 感染组、TREM2-shRNA-2 感染组、TREM2-shRNA-3 感染组、阴性对照组及空白对照组。TREM2-shRNA-1 感染组、TREM2-shRNA-2 感染组、TREM2-shRNA-3 感染组、阴性对照组分别感染 TREM2-shRNA-1、TREM2-shRNA-2、TREM2-shRNA-3、shRNA 空质粒，空白组不做任何处理。感染 120 h 取各组细胞，Q-PCR.法检测各组 TREM2 mRNA，计算细胞沉默效率。结果 TREM2-shRNA-1、TREM2-shRNA-2、TREM2-shRNA-3 转染293T 后镜下均观察到 GFP，包装浓缩的慢病毒滴度分别为( 4 × 108) 、( 4 × 108) 、( 5 × 108) TU/mL。与空白对照组和阴性对照组比较，TREM2-shRNA-1 感染组、TREM2-shRNA-2 感染组、TREM2-shRNA-3 感染组 TRME2 mRNA 相对表达量均降低( P 均 ＜ 0． 05) ; 与 TREM2-shRNA-1 感染组、TREM2-shRNA-3 感染组比较，TREM2-shRNA-2 感染组TRME2 mRNA 相对表达量降低( P 均 ＜ 0． 05) 。TREM2-shRNA-1 感染组、TREM2-shRNA-2 感染组、TREM2-shRNA-3感染组、阴性对照组的沉默效率分别为 49． 4% ± 3． 98% 、79． 7% ± 2． 01、65． 3% ± 2． 41% 和 39． 2% ± 6． 98% ，TREM2-shRNA2 组沉默效率最高。结论 成功构建 TREM2-shRNA-1、TREM2-shRNA-2、TREM2-shRNA-3。TREM2-shRNA-1、TREM2-shRNA-2、TREM2-shRNA-3 均可沉默小鼠 BV2 小胶质细胞中 TREM2 基因表达，以 TREM2-shRNA-.2 沉默效果最好。