Simple methods for the 3' biotinylation of RNA.
Simple methods for the 3' biotinylation of RNA.
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DOI：
10.1261/rna.042986.113
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发表时间：
2014-03
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Wahle E
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Moritz B;Wahle E
用生物素标记RNA具有许多有用的应用，包括亲和选择。本文介绍了三种简单直接的RNA分子3′端生物素化技术。RNA的生物素化允许其与链霉亲和素紧密偶联，因此可用于许多类型的实验，例如，下拉菜单在这里，我们描述了三种简单的技术，生物素化的3′端的RNA分子产生的化学或酶促合成。首先，用粟酒裂殖酵母非典型poly（A）聚合酶Cid 1或大肠杆菌poly（A）聚合酶和N6-生物素-ATP进行延伸是简单、有效的，并且通常独立于待标记的RNA分子的3′-末端序列而适用。然而，根据酶和反应条件，掺入几个或多个生物素化的核苷酸。其次，报告了T4 DNA连接酶的夹板依赖性连接可用于将生物素化的和可能的其他化学修饰的DNA寡核苷酸连接到RNA 3′端的条件，即使这些寡核苷酸是异质的，这对于酶促合成产物是典型的。第三，我们描述了使用的模板导向的填充反应，使用生物素dUTP和，由于酶的校对活动，可以科普更多的3′异质性的E29 DNA聚合酶。
Tagging RNAs with biotin has numerous useful applications including affinity selections. This paper describes three simple and straightforward techniques for biotinylating the 3′ ends of RNA molecules. Biotinylation of RNA allows its tight coupling to streptavidin and is thus useful for many types of experiments, e.g., pull-downs. Here we describe three simple techniques for biotinylating the 3′ ends of RNA molecules generated by chemical or enzymatic synthesis. First, extension with either the Schizosaccharomyces pombe noncanonical poly(A) polymerase Cid1 or Escherichia coli poly(A) polymerase and N6-biotin-ATP is simple, efficient, and generally applicable independently of the 3′-end sequences of the RNA molecule to be labeled. However, depending on the enzyme and the reaction conditions, several or many biotinylated nucleotides are incorporated. Second, conditions are reported under which splint-dependent ligation by T4 DNA ligase can be used to join biotinylated and, presumably, other chemically modified DNA oligonucleotides to RNA 3′ ends even if these are heterogeneous as is typical for products of enzymatic synthesis. Third, we describe the use of ϕ29 DNA polymerase for a template-directed fill-in reaction that uses biotin-dUTP and, thanks to the enzyme's proofreading activity, can cope with more extended 3′ heterogeneities.
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影响因子：
14.9
作者：
Proudnikov, D;Mirzabekov, A
通讯作者：
Mirzabekov, A
DOI：
10.1111/j.1432-1033.1973.tb02953.x
发表时间：
1973-01-01
期刊：
EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY
影响因子：
--
作者：
SIPPEL, AE
通讯作者：
SIPPEL, AE
影响因子：
14.8
作者：
Huang, Faqing;He, Jun;Guo, Yanlin
通讯作者：
Guo, Yanlin
影响因子：
1.3
作者：
Kore, Anilkumar R.;Charles, Irudaya;Kuersten, Scott
通讯作者：
Kuersten, Scott
影响因子：
4.5
作者：
Lagunavicius, Arunas;Kiveryte, Zivile;Janulaitis, Arvydas
通讯作者：
Janulaitis, Arvydas