Reversible RNA acylation for control of CRISPR-Cas9 gene editing.
Reversible RNA acylation for control of CRISPR-Cas9 gene editing.
复制标题
用于控制CRISPR-Cas9基因编辑的可逆RNA酰化。
DOI：
10.1039/c9sc03639c
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发表时间：
2019-12-02
期刊：
影响因子：
8.4
通讯作者：
Kool ET
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Habibian M;McKinlay C;Blake TR;Kietrys AM;Waymouth RM;Wender PA;Kool ET
我们报告了转录后化学方法的发展，这些方法能够在体外测定和活细胞中控制CRISPR-Cas9基因编辑活性。我们表明叠氮化物取代的酰基咪唑试剂（NAI-N3）在缓冲液中在20分钟内有效地酰化CRISPR单向导RNA（sgRNA）。多酰化（“隐形”）sgRNA在体外用Cas9进行DNA切割时完全失活，并且在膦处理后定量恢复活性。通过使用改变电荷的可释放转运蛋白（CART）能够将隐藏的sgRNA和Cas9 mRNA递送到HeLa细胞中，CART在转染与编码功能性mRNA的Cas9共复合的sgRNA方面优于商业转染试剂。在用膦处理以去除阻断酰基后，CRISPR-Cas9在细胞中的基因组DNA切割得到有效恢复。我们的研究结果强调了可逆RNA酰化作为基因组编辑功能时间控制的新方法的实用性。我们报告了转录后化学方法的发展，这些方法能够在体外测定和活细胞中控制CRISPR-Cas9基因编辑活性。
We report the development of post-transcriptional chemical methods that enable control over CRISPR–Cas9 gene editing activity both in in vitro assays and in living cells. We show that an azide-substituted acyl imidazole reagent (NAI-N3) efficiently acylates CRISPR single guide RNAs (sgRNAs) in 20 minutes in buffer. Poly-acylated (“cloaked”) sgRNA was completely inactive in DNA cleavage with Cas9 in vitro, and activity was quantitatively restored after phosphine treatment. Delivery of cloaked sgRNA and Cas9 mRNA into HeLa cells was enabled by the use of charge-altering releasable transporters (CARTs), which outperformed commercial transfection reagents in transfecting sgRNA co-complexed with Cas9 encoding functional mRNA. Genomic DNA cleavage in the cells by CRISPR–Cas9 was efficiently restored after treatment with phosphine to remove the blocking acyl groups. Our results highlight the utility of reversible RNA acylation as a novel method for temporal control of genome-editing function. We report the development of post-transcriptional chemical methods that enable control over CRISPR–Cas9 gene editing activity both in in vitro assays and in living cells.
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影响因子：
6.2
作者：
Benner, Nancy L.;Near, Katherine E.;Wender, Paul A.
通讯作者：
Wender, Paul A.
影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
DOI：
10.1073/pnas.1810002115
发表时间：
2018-09-25
影响因子：
11.1
作者：
Haabeth, Ole A. W.;Blake, Timothy R.;Levy, Ronald
通讯作者：
Levy, Ronald
影响因子：
15
作者：
Hemphill J;Borchardt EK;Brown K;Asokan A;Deiters A
通讯作者：
Deiters A
影响因子：
14.8
作者：
Davis, Kevin M.;Pattanayak, Vikram;Thompson, David B.;Zuris, John A.;Liu, David R.
通讯作者：
Liu, David R.