A functional CFTR-NBF1 is required for ROMK2-CFTR interaction.
A functional CFTR-NBF1 is required for ROMK2-CFTR interaction.
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ROMK2-CFTR 相互作用需要功能性 CFTR-NBF1。
DOI：
10.1152/ajprenal.1997.273.5.f843
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发表时间：
1997
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Egan,ME
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
McNicholas,CM;NasonJr,MW;Guggino,WB;Schwiebert,EM;Hebert,SC;Giebisch,G;Egan,ME
在以前的一项关于异种卵母细胞内面向外的研究中，我们证明囊性纤维化跨膜传导调节因子（CFTR）增强了共表达的内向整流K+通道ROMK 2（C. M. McNicholas，W. B。Guggino，E. M. Schwiebert，S. C. Hebert，G. Giebisch和M. E.埃根，美国国家科学院院刊。Acad. Sci. USA93：8083-8088，1996）。在本研究中，我们采用双微电极电压钳技术测量了异种卵母细胞的全细胞K+电流，并通过CFTR进一步表征了ROMK 2对格列本脲的敏感性增强。格列本脲在同时表达ROMK 2和CFTR的卵母细胞中抑制K+电流56%，但在仅表达ROMK 2的卵母细胞中仅抑制11%。为了检查CFTR的第一个核苷酸结合折叠（NBF 1）在ROMK 2-CFTR相互作用中的作用，我们研究了当与包含NBF 1结构域中或周围突变的CFTR构建体共表达时ROMK 2的格列本脲敏感性。在用ROMK 2和具有完整NBF 1的CFTR截短构建体（CFTR-K593 X）共注射的卵母细胞中，格列本脲抑制了46%的K+电流。然而，在共注射ROMK 2和CFTR突变体（CFTR-K370 X）的卵母细胞中，格列本脲抑制了12%的K+电流。此外，同时表达具有天然存在的NBF 1点突变的ROMK 2和CFTR突变体CFTR-G551 D或CFTR-A455 E的卵母细胞显示出仅14%和25%的格列本脲可激活的K+电流。由于CFTR突变改变了NBF 1结构域，降低了共表达的ROMK 2通道对格列本脲的敏感性，因此我们得出结论，NBF 1基序对于赋予磺酰脲敏感性的CFTR-ROMK 2相互作用是必需的。
In a previous study on inside-out patches ofXenopusoocytes, we demonstrated that the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) enhances the glibenclamide sensitivity of a coexpressed inwardly rectifying K+channel, ROMK2 (C. M. McNicholas, W. B. Guggino, E. M. Schwiebert, S. C. Hebert, G. Giebisch, and M. E. Egan.Proc. Natl. Acad. Sci. USA93: 8083–8088, 1996). In the present study, we used the two-microelectrode voltage-clamp technique to measure whole cell K+currents inXenopusoocytes, and we further characterized the enhanced sensitivity of ROMK2 to glibenclamide by CFTR. Glibenclamide inhibited K+currents by 56% in oocytes expressing both ROMK2 and CFTR but only 11% in oocytes expressing ROMK2 alone. To examine the role of the first nucleotide binding fold (NBF1) of CFTR in the ROMK2-CFTR interaction, we studied the glibenclamide sensitivity of ROMK2 when coexpressed with CFTR constructs containing mutations in or around the NBF1 domain. In oocytes coinjected with ROMK2 and a truncated construct of CFTR with an intact NBF1 (CFTR-K593X), glibenclamide inhibited K+currents by 46%. However, in oocytes coinjected with ROMK2 and a CFTR mutant truncated immediately before NBF1 (CFTR-K370X), glibenclamide inhibited K+currents by 12%. Also, oocytes expressing both ROMK2 and CFTR mutants with naturally occurring NBF1 point mutations, CFTR-G551D or CFTR-A455E, display glibenclamide-inhibitable K+currents of only 14 and 25%, respectively. Because CFTR mutations that alter the NBF1 domain reduce the glibenclamide sensitivity of the coexpressed ROMK2 channel, we conclude that the NBF1 motif is necessary for the CFTR-ROMK2 interaction that confers sulfonylurea sensitivity.
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