miR-214靶向抑制CaMKⅡ调控H9c2心肌细胞的氧化应激
miR-214靶向抑制CaMKⅡ调控H9c2心肌细胞的氧化应激
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DOI：
10.16016/j.1000-5404.201901002
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
石蓓
中科院分区：
文献类型：
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作者：
王艳;赵然尊;刘德斌;刘围围;李朝富;王正龙;陈文明;石蓓
目的探讨miR-214靶向抑制CaMKⅡ调节缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞氧化应激的作用。方法采用大鼠H9c2心肌细胞为研究对象,实验分4组,①正常组:正常培养的心肌细胞; ②缺氧复氧组:心肌细胞经缺氧24 h复氧6 h处理; ③miR-214模拟物组:心肌细胞转染miR-214模拟物后予缺氧复氧处理; ④miR-214模拟物阴性对照组:心肌细胞转染miR-214模拟物阴性对照后予以缺氧复氧处理。予以CCK-8法检测各组细胞活性,qPCR检测各组细胞miR-214的变化,流式细胞术、TUNEL法及SOD、MDA试剂盒检测各组细胞氧化应激水平及凋亡效应;双荧光素酶报告基因检测miR-214与CaMKⅡ相关性,qPCR和Western blot检测CaMKⅡ mRNA和蛋白表达变化。随后用腺病毒转染过表达细胞中CaMKⅡ进行回复实验,并采用上述方法检测细胞氧化应激水平及凋亡状态。结果CCK-8检测结果显示,与正常组比较,缺氧复氧组心肌细胞活性下降,miR-214模拟物组可明显改善该作用(P < 0.05) 。qPCR结果显示,与正常组比较,缺氧复氧组miR-214表达下降,而miR-214模拟物组miR-214高表达(P < 0.05) 。与正常组比较,缺氧复氧组细胞ROS、MDA表达水平及TUNEL阳性细胞数明显增高,SOD表达显著下降(P < 0.05);与缺氧复氧组比较,miR-214模拟物组ROS、MDA水平及TUNEL阳性细胞数明显下降,SOD表达明显增高(P < 0.05) 。经TargetScan检测发现miR-214与CaMKⅡ存在结合位点,双荧光素酶报告基因也验证了在H9c2心肌细胞中miR-214可结合CaMKⅡ。此外,qPCR及Western blot结果显示,与正常组比较,缺氧复氧可致CaMKⅡ在mRNA及蛋白水平表达升高,miR-214可显著抑制缺氧复氧诱导的CaMKⅡ表达。采用腺病毒过表达细胞中CaMKⅡ后,miR-214抗氧化应激及凋亡效应被部分阻断。结论过表达miR-214可通过抑制CaMKⅡ转录后翻译过程,改善H9c2心肌细胞氧化应激水平及凋亡状态。