人TSHR A亚单位重组腺相关病毒体内外表达研究
人TSHR A亚单位重组腺相关病毒体内外表达研究
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DOI：
10.7652/jdyxb202005009
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发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
伍丽萍
中科院分区：
文献类型：
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作者：
赵凤仪;王静雅;谢宝松;赵媛;丁习;赵洋;高楚淇;德吉措穆;施秉银;伍丽萍
目的探讨人TSHR A亚单位重组腺相关病毒(rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen)能否在小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)及小鼠体内表达及其表达效率。方法以rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen感染NIH3T3,Western blotting检测目的基因蛋白表达;分别以不同剂量rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen注射雌性BALB/c小鼠,免疫荧光法检测TSHR A亚单位蛋白在各个器官的表达,免疫放射法测定血清TSHR抗体(TRAb)滴度。结果感染rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreenNIH3T3细胞48 h及72 h后均有目的蛋白表达,与24 h相比较明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);荧光显微镜下可见腿部骨骼肌、心肌、肝脏、脾脏有不同程度的TSHR289表达;放免法测定结果显示,注射剂量越大,血清TRAb抗体滴度越高,但只有高剂量和对照组之间有统计学差异(P<0.05)。中剂量和高剂量肌内注射在第4、8、12周小鼠体内均有抗体反应,但以第4周最强,4~8周逐渐减弱,抗体持续时间可达12周。结论rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen可在体外及小鼠体内高效表达,并具有较强免疫原性,可能成为制备Graves病模型的一种重要手段。