Amphipathic polymers enable the study of functional membrane proteins in the gas phase.
Amphipathic polymers enable the study of functional membrane proteins in the gas phase.
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DOI：
10.1021/ac302223s
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发表时间：
2012-11-20
影响因子：
7.4
通讯作者：
Ashcroft, Alison E.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Leney, Aneika C.;McMorran, Lindsay M.;Radford, Sheena E.;Ashcroft, Alison E.
众所周知，膜蛋白由于其在水溶液中的不溶性而难以使用质谱法（MS）进行分析。目前用于研究完整膜蛋白的MS方法涉及在去污剂中的溶解。然而，去污剂可以使蛋白质不稳定，导致蛋白质解折叠和聚集，或导致无活性实体。两亲性聚合物，称为amphipols，可以用作洗涤剂的替代品，并已被证明可以提高膜蛋白的稳定性。在这里，我们展示了利用电喷雾电离质谱（ESI-MS）研究膜蛋白的结构和功能特性的两性分子的效用。利用ESI-MS结合离子迁移谱（IMS）技术，研究了细菌外膜β-桶蛋白OmpT和PagP与Amphipol A8-35复合物的功能特性，并在气相中证实了其结构完整性。这些数据说明了ESI-IMS-MS在从两亲性聚合物-膜复合物中分离两亲性聚合物的不同群体，同时在气相中保持构象上“类天然”的膜蛋白结构方面的能力。总之，这些数据表明了使用MS分析膜蛋白的Amphipol的潜在重要性和实用性。
Membrane proteins are notoriously challenging to analyze using mass spectrometry (MS) because of their insolubility in aqueous solution. Current MS methods for studying intact membrane proteins involve solubilization in detergent. However, detergents can destabilize proteins, leading to protein unfolding and aggregation, or resulting in inactive entities. Amphipathic polymers, termed amphipols, can be used as a substitute for detergents and have been shown to enhance the stability of membrane proteins. Here, we show the utility of amphipols for investigating the structural and functional properties of membrane proteins using electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS). The functional properties of two bacterial outer-membrane β-barrel proteins, OmpT and PagP, in complex with the amphipol A8-35 are demonstrated, and their structural integrities are confirmed in the gas phase using ESI-MS coupled with ion mobility spectrometry (IMS). The data illustrate the power of ESI-IMS-MS in separating distinct populations of amphipathic polymers from the amphipol–membrane complex while maintaining a conformationally “nativelike” membrane protein structure in the gas phase. Together, the data indicate the potential importance and utility of amphipols for the analysis of membrane proteins using MS.
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DOI：
10.1046/j.1432-1327.2000.01073.x
发表时间：
2000-02-01
期刊：
EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY
影响因子：
--
作者：
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