Induction of nuclear translocation of mutant cytoplasmic p53 by geranylgeranoic acid in a human hepatoma cell line.
Induction of nuclear translocation of mutant cytoplasmic p53 by geranylgeranoic acid in a human hepatoma cell line.
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DOI：
10.1038/srep04419
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发表时间：
2014-03-24
影响因子：
4.6
通讯作者：
Shidoji Y
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Iwao C;Shidoji Y
HuH-7 (Y220C) 和 PLC/PRF/5 (R249S) 等人肝癌细胞系中的突变 p53 蛋白在细胞质中积聚，并丧失转录功能。香叶基香叶酸 (GGA) 是一种天然存在的无环二萜，可诱导两种细胞系的细胞死亡，但不会诱导含有野生型 p53 的 HepG2 细胞死亡。在这里，我们证明微摩尔浓度的 GGA 会诱导 p53 突变细胞系中细胞质 p53 的快速核转位，并且 p53 敲低可减轻 HuH-7 细胞中 GGA 诱导的细胞死亡。无细胞实验表明，GGA 能够从线粒体后级分中假定的巨大大分子聚集体中释放 670-kD 含有 p53 的复合物，如蓝色天然梯度 PAGE 所示。在测试的几个 p53 靶基因中，GGA 上调 PUMA 基因表达，而伊维菌素（一种输入蛋白 α/β 抑制剂）可阻断 GGA 诱导的细胞质 p53 核转位，并抑制 GGA 诱导的 HuH-7 细胞中 PUMA mRNA 水平的上调。总而言之，这些数据表明，GGA 处理通过突变体 p53 从细胞质聚集体解离来刺激突变体 p53 的核转位，这可能对于 GGA 诱导的细胞死亡至关重要。
Mutant p53 proteins in human hepatoma cell lines such as HuH-7 (Y220C) and PLC/PRF/5 (R249S) accumulate in the cytoplasm, and lose their transcriptional function. Geranylgeranoic acid (GGA) is a naturally occurring acyclic diterpenoid that induces cell death in both cell lines, but not in HepG2 cells harboring wild-type p53. Here, we demonstrate that micromolar concentrations of GGA induce a rapid nuclear translocation of cytoplasmic p53 in both p53-mutant cell lines and p53 knockdown attenuates GGA-induced cell death in HuH-7 cells. Cell-free experiments demonstrate that GGA is able to release 670-kD p53-containing complexes from putative huge macromolecular aggregates in post-mitochondrial fractions as revealed on blue-native gradient PAGE. Among several p53-target genes tested, GGA upregulates PUMA gene expression, and ivermectin, an inhibitor for importin α/β, blocks GGA-induced nuclear translocation of cytoplasmic p53 and suppresses GGA-induced upregulation of PUMA mRNA levels in HuH-7 cells. Taken together, these data suggest that GGA treatment stimulates a nuclear translocation of mutant p53 through its dissociation from cytoplasmic aggregates, which may be essential for GGA-induced cell death.
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