Real-time observation of functional specialization among phosphorylation sites in CFTR.
Real-time observation of functional specialization among phosphorylation sites in CFTR.
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DOI：
10.1085/jgp.202213216
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发表时间：
2023-04-03
影响因子：
3.8
通讯作者：
Ahern, Christopher A.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Infield, Daniel T.;Schene, Miranda E.;Fazan, Frederico S.;Galles, Grace D.;Galpin, Jason D.;Ahern, Christopher A.
Infield和合著者介绍了一种方法，通过对笼状丝氨酸非天然氨基酸的位点特异性编码，可以实时观察磷酸丝氨酸残基的个体功能贡献。磷调节在生物学中无处不在。定义多价系统中单个磷酸化位点的功能角色仍然是特别具有挑战性的。因此，我们应用了化学生物学方法来光控制典型阴离子通道CFTR中单个候选磷酸丝氨酸的状态，同时测量通道活性。数据显示了蛋白激酶A共识位点之间惊人的不等效性，磷酸化后通道活性的变化从<10%到bb1000%不等。值得注意的是，S813的缓慢磷酸化表明该位点对CFTR的完全激活具有限速作用。此外，该方法揭示了S813磷酸化与附近位点S795之间意想不到的偶联。总的来说，这些数据建立了一个实验途径，以了解特定的磷酸化丝氨酸在复杂的磷酸化调控域中的作用。这一策略可用于其他真核蛋白的磷酸化调控研究。
Infield and co-authors introduce an approach whereby the individual functional contribution of phosphoserine residues can be observed in real time via site-specific encoding of a caged-serine unnatural amino acid. Phosphoregulation is ubiquitous in biology. Defining the functional roles of individual phosphorylation sites within a multivalent system remains particularly challenging. We have therefore applied a chemical biology approach to light-control the state of single candidate phosphoserines in the canonical anion channel CFTR while simultaneously measuring channel activity. The data show striking non-equivalency among protein kinase A consensus sites, which vary from <10% to >1,000% changes in channel activity upon phosphorylation. Of note, slow phosphorylation of S813 suggests that this site is rate-limiting to the full activation of CFTR. Further, this approach reveals an unexpected coupling between the phosphorylation of S813 and a nearby site, S795. Overall, these data establish an experimental route to understanding roles of specific phosphoserines within complex phosphoregulatory domains. This strategy may be employed in the study of phosphoregulation of other eukaryotic proteins.
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影响因子：
5.5
作者：
King, J. Darwin, Jr.;Fitch, Adam C.;Hallows, Kenneth R.
通讯作者：
Hallows, Kenneth R.
影响因子：
3.6
作者：
Terlizzi, Vito;Di Lullo, Antonella Miriam;Braggion, Cesare
通讯作者：
Braggion, Cesare
影响因子：
5.8
作者：
Gilissen, Julie;Geubelle, Pierre;Hanson, Julien
通讯作者：
Hanson, Julien
影响因子：
14.8
作者：
Lemke, Edward A.;Summerer, Daniel;Schultz, Peter G.
通讯作者：
Schultz, Peter G.
DOI：
10.1016/bs.apha.2014.11.008
发表时间：
2015
期刊：
Advances in pharmacology (San Diego, Calif.)
影响因子：
--
作者：
Nakamura Y;Darnieder LM;Deeb TZ;Moss SJ
通讯作者：
Moss SJ